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1、福建医科大学学报2008November,Vol42No6JFujianMedUniv503新生鼠坏死性小肠结肠炎肠细胞凋亡率变化及意义董海英,刘健,陈兢芳,卓玲,杨燕珍,吴斌摘要:目的探讨新生鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)肠细胞凋亡率变化及其与肠组织损伤程度的关系。方法出生48h的SD大鼠16只随机分成模型组和对照组,每组8只。模型组给予鼠乳代用品人工喂养,100%氮气缺氧90s,4℃冷刺激10min,每天2次,连续3d,建立NEC模型;对照组与母鼠同笼,鼠乳喂养,未进行缺氧冷刺激。实验结束后24h处死大鼠,留取十二指肠下端至直肠上端肠道组织进
2、行肠组织损伤评分和肠细胞凋亡率检测。每组随机抽取2例回盲部近端小肠进行肠黏膜透射电镜检查。结果模型组肠组织学改变与NEC时改变一致,透射电镜显示肠黏膜出现大量凋亡细胞,部分形成凋亡小体。模型组和对照组肠组织损伤评分分别为(3.33±0.59)和(0.13±0.17);肠细胞凋亡率分别为(31.0±10.6)%和(4.6±3.9)%;二者比较差别均有统计学意义。肠细胞凋亡率与肠组织损伤评分呈显著正相关(r=0.771,P<0.01)。结论NEC时肠细胞凋亡明显增加。肠细胞凋亡可能是造成新生鼠NEC肠道进行性损伤的病理基础。关键词:小肠结肠炎,伪膜
3、性;婴儿;新生,疾病;疾病模型,动物;细胞凋亡中图分类号:R725.746.2文献标识码:A文章编号:167224194(2008)0620503204坏死性小肠结肠炎(necrotizingenterocolitis,8只。模型组新生大鼠与母鼠分开,置入保育箱中,NEC)是新生儿时期严重的肠道炎症性疾病,是新采用鼠乳代用品人工喂养,100%氮气缺氧90s,生儿重症监护病房中最常见的外科急症。虽然大4℃冷刺激10min,每天2次,连续3d,建立新生鼠[3]量研究证实NEC发病与早产、肠管缺氧缺血、肠内NEC动物模型;对照组继续与母鼠同笼,鼠乳喂
4、喂养、细菌感染等有关,但其确切发病机制仍不明养,未进行缺氧冷刺激。NEC模型组在造模结束后[122]确。近年来研究证实,胃肠道屏障功能受损是胃24h和对照组新生鼠空腹断头处死,打开腹腔取出肠功能障碍发生的病理基础,是多种严重疾病和器十二指肠下端至直肠上端的肠道组织。官损伤的共同病理生理过程;其中,胃肠上皮细胞1.2主要试剂雅培加营素蛋白质粉由美国雅培结构的完整是维持其屏障功能的形态学基础,肠上公司提供;低出生体质量婴儿配方奶粉由雀巢公司皮细胞及细胞间相互连接紧密程度及其完整性决提供;中/长链脂肪乳注射液(C6～24)购自华瑞制药[2]定肠黏膜屏
5、障通透性。本研究通过人工喂养、缺有限公司。胃蛋白酶(美国Sigma公司);Aanxin氧和冷刺激复制新生大鼠NEC模型,采用流式细V/PI试剂盒(美国贝克曼公司)。根据实验要求,自胞仪检测肠细胞凋亡率,结合肠组织损伤评分、肠制新生鼠保育箱,保育箱内环境温度、湿度用Hygro黏膜电镜观察,探讨新生大鼠NEC发病过程中肠电子温湿度计24h监测。细胞凋亡率变化及其与肠损伤的关系,为阐明NEC1.3方法的发病机制、寻找直接有效的治疗药物提供实验1.3.1病理学检查取回盲部近端肠管1cm置于依据。10%甲醛中固定,石蜡包埋,取冠状切面,H2E染色后在光镜
6、下观察肠组织形态学改变。采用双盲法1材料与方法进行肠组织损伤评分。参照文献[1,3]分为4级:01.1动物及分组清洁级新生SD大鼠16只,出分为正常,1分为轻微黏膜下和或固有层分离,2分生<48h,购自上海斯莱克实验动物有限公司为中度黏膜下和/或固有层分离和/或黏膜下和肌[SCXK(沪)200720005]。剔除每胎>12只或每胎肉层水肿,3分为严重黏膜下和/或固有层分离和/<6只者。每窝5～6只,雌雄不限,体质量5～或黏膜下和肌肉层水肿、局部绒毛脱落,4分为肠绒10g。生后48h随机分成模型组和对照组,每组各毛消失伴肠坏死;组织学评分≥2分确
7、定为NEC。每一例新生鼠回盲部肠组织标本观察3个视野,取收稿日期:2008206218修回日期:2008209205其平均值。基金项目:福建省卫生厅青年科研课题(200721210)作者单位:福建医科大学附属第一医院儿科,福州3500051.3.2凋亡率检测除留取回盲部远端结肠1cm作者简介:董海英(1977-),女,住院医师,福建医科大学2006级硕士研究生用于常规病理检查及肠组织损伤评分外,将其余所通讯作者:刘健有肠管(从十二指肠下端至直肠上端肠道组织)用504福建医科大学学报2008年11月第42卷第6期于肠细胞凋亡检测。剖开肠管,棉签小
8、心清除粪Hu212A型或飞利浦EM208型透射电镜下观察上便,用冰生理盐水漂洗1～2遍,再用PBS液漂洗至皮细胞紧密连接、微绒毛改变,肠上皮细胞凋亡肠
