大黄对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型肠损伤防治作用的研究

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1、硕士学位论文大黄对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型肠损伤防治作用的研究硕士研究生：韩娟指导教师：封志纯摘要目的坏死性小肠结肠炎(NEC)是新生儿时期严重的肠道疾病，也是新生儿尤其是未成熟儿早期死亡的重要原因，且随着低出生体重儿存活率的增加，NEC的发病率呈上升趋势。1964年PERSON首次报道NEC，虽然临床及基础对其进行了大量研究，但至今对其确切的发病机制仍不清楚。NEC是一种复杂的多因素疾病，目前公认的与NEC发病有关的因素包括，早产、缺血缺氧、胃肠道喂养、感染及炎症等，NEC一旦发生，病情进展迅速，预后不好。

2、手术切除回肠终端可以导致维生素B12缺乏和贫血，肠切除广泛引起短肠综合症和营养不良，救治不及时容易导致死亡。目前本病尚无特效的防治手段，因此，积极地做好预防工作，早期防止病情进展显得尤为重要。大黄是蓼科多年生草本植物，多年来一直用于新生儿黄疸的临床治疗，近年对大黄在胃肠道的作用研究较多，综合起来主要有泻下、保护黏膜屏障、改善胃肠道微循环、促进胃肠道蠕动、同时还能预防肠道细菌易位。其效能正好与新生儿坏死性小肠结肠炎产生机制相反，理论上具有防治NEC的作用。本试验采用新生48小时的SD大鼠给予缺氧+冷刺激，以胃管注

3、入大黄煎液为阳性对照，生理盐水组为阴性对照，未给予缺氧+冷刺激者为正常对照组，通过对各组肠组织损伤情况进行病理学评分，客观评价大黄对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型肠损伤的保护作用，同时，通过对肠组织匀浆中PAF、TNF．a含量的检测，探讨大黄对肠损伤的保护作用是否与降低中文摘要肠组织PAF、TNF．a浓度有关，为应用大黄防治新生鼠坏死性小肠结肠炎提供科学依据。方法选用Sprague-Dewley新生2日龄大鼠，雌雄不限，体重5—109，与母鼠同笼，母乳喂养。往缺氧箱内注入100％N2，应用测氧仪测得箱内氧浓度为O，

4、将NEC组20只新生鼠放入缺氧箱内90秒，取出后再将其放入4"C冰箱冷刺激，lO分钟后取出，每天2次，连续3天。将所有动物随机分为3组，A组(大黄治疗组)：在母乳喂养的同时每日经喂管给予大黄煎液0．2ml，每日两次，间隔8小时，连续三天；B组(生理盐水对照组)：在母乳喂养的同时每日经喂管给予生理盐水0．2ml，每日两次，间隔8小时，连续三天；C组(正常对照组)：未进行缺氧+冷刺激实验。每组10只。所有动物第五天断头处死，取近回盲部肠组织Iem甲醛固定，石蜡包埋，切片及HE染色，进行病理学检查及肠损伤评分，根据固

5、有层分离、中性粒细胞浸润、绒毛脱落、坏死，血管扩张，间质水肿，将肠损伤分为¨级，组织学评分>2确定为NEC；剩余肠管放入冷生理盐水中漂洗、滤纸拭干称重，加9倍的生理盐水制成10％的组织匀浆，在4℃低温离心10000r／min，离心15分钟后取上清液分装于3个EP管中，用于检测肠组织PAF、TNF．a的OD值以及肠组织中蛋白含量，采用ELISA双抗夹心法检测，试剂盒分别购自武汉博士德公司和深圳晶美公司，肠组织PAl：、TNF．a含量以每毫克肠组织蛋白中PAF／TNF·a含量表示(pg／mgpro)。体重及肠组织中

6、TNF—a含量比较采用单因素方差分析，组间比较采用Bonferroni，肠组织PAl：含量经检验方差不齐，组间检验用Brown．Forsythe法，组内比较采用DunnettT3，病理评分比较应用Kruskal，WallisH检验、两组发病率比较采用fisher精确概率法检验，a=0．05为显著性检验标准，肠组织PAF、TNF．a含量与肠损伤程度进行Spearman相关性分析，采用SPSS11．5统计学软件进行统计分析。结果模型组新生鼠在造模后均出现精神萎糜、活动减少、反应迟钝，B组新生n硕士学位论文鼠在造模后

7、第三天腹胀明显，活动明显减少，刺激后反应差，外观消瘦，皮下脂肪少，皮肤皱褶多，A组新生鼠腹泻明显，为黄色稀便，活动度及外观消瘦程度较B组轻，C组无腹泻，活动好，皮下脂肪丰满。A、B、C三组新生鼠第5天时体重分别为12．1+0．434、10．80士O．422、13．140士0．270；体重增加值分别为3．451士0．368、2．103士0．206、4．429士0．404，三组第5天时体重、体重增加值之间比较均有显著差异性，F---93．461，F=I19．632，P<0．001。肠组织大体标本可见A组新生鼠肠管淡

8、黄色，稍暗，肠壁薄，可见肠腔内较多小气泡；B组新生鼠肠管颜色晦暗，肠壁薄，表面偶有小出血点，质地脆，易断裂，肠腔可见较多气泡；C组新生鼠肠管淡黄色，有光泽，质地韧，肠管壁厚。三组肠组织病理切片可见，A组部分上皮绒毛脱落，粘膜下层及肌肉层水肿，B组可见大量的肠绒毛脱落甚至全层坏死，C组上皮绒毛整齐，A、B、C三组病理评分分别为1．3士0．48、2．9士0．57、0．2士0．42，各组之间