抗血管内皮生长因子小干扰rna抑制大鼠角膜新生血管.pdf

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1、上海交通大学博士学位论文抗血管内皮生长因子小干扰RNA抑制大鼠角膜新生血管姓名：李瑾申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：范先群20060501 角膜新生血管化�������������，��常导致角膜失去透明性，是致盲的重要原因��������的变化特征，探讨基因干预的最佳时段；采用��联合培养角膜材料和方法 结果上皮细胞均可表达����在角膜上皮细胞和以羊膜为载体的角膜上皮细胞中的表达量无显著性差异；�甐��猻��转染的角膜上皮细胞和基质细胞，其��基因和蛋白表��，�� 水平各时段均显著低于对照组。 ������������������������������，�

2、�������� ���������������������—���猼������������������������������ �����������瓵������������������������ �������������瑃���������—������������������������������������������ ������，�������������，���� 符号说明表 第一章皮细胞线粒体也受到一定的损伤。 大量研究表明��主要作用是。�埃��增加微血管通透性，促进血浆纤维蛋������等“�在动物角膜中注射表达�� 管形成，而给予��抗体则

3、可抑制眼内新生血管。以上各项研究表明��是最主要的血管形成因子之一。��—��用于抑制脉络膜新生血管的研究，取得了良好的实验效果，为��技术应��狟�型受体的���转染鼠角膜组织，体内实验结果显示����特异性实验证明了角膜组织具有��效应。���等“�研究了���在眼部的表达时限， 生排斥反应的高危因素。过程中发挥关键作用。目前认为，斑管内皮生长因子���是最主要的血管形成� 北京东方特力科贸中心哈尔滨东联公司美国�公司���倒置相差显微镜���薷泼玖姿峒罨撼逡���通用型��免疫组化试剂盒��公司，丹麦武汉博士德生物工程有限公司�甊�狿�试剂 �×反应缓冲液北京华美生

4、物工程公司美国库尔特公司北京华美生物工程公司上海生物工程公司美国�����公司����籗�笫螅��眼，用��疞盐酸氯胺酮注射液���／�肌肉注射麻醉。无链霉素�鱨��痬�的��航��次，待用。 � ��．��免疫组化鉴定��ū瓯窘�攵�妆郊邮��旌弦褐衛��，然后换入已熔的纯石蜡�������渭��フ�Ｃ嘌蜓G澹���，�分钟；���パG澹�渭覣�抗体�：�����，�分钟； 上皮细胞����的表达�����煸龋�檬椅�分钟���煸��胫樱�帽��分钟；����ヒ掖糽�，���胄�分钟，�疌�馗匆淮�；���掖几稍锍恋�“�分钟；���煸龋���疌保存备用：� 微波炉煮沸

5、��左右时，加�％甲醛��，灌取�������逡叶����在��������苤屑尤胱躌�抽提液和��—���棺芴寤���中各样品总��昧课�．�力口入�����������������瓹处理�种樱��侠淙矗�椅赂咚倮胄�秒钟，将所有溶液收集到管底。 ��攵韵喙鼗�蛐蛄猩杓铺匾煲��表����谖蘧�”赑�管中按次序加入下列试剂�� �疌保存��痬���缬臼奔���，�染色。紫外透射成像系统观察，电脑摄像储存，凝��表达相对值����庵担疓��吸光值。胞形态与原代相似。 �������� ��������� ��� 以羊膜为载体培养角膜上皮层，由羊膜基底膜和复层的角膜上皮细胞

6、组成，共���������������������� �����������������������角膜上皮细胞、基质细胞、羊膜为载体培养角膜上皮细胞�� 条带很清晰。����的显色强度为�簂，说明��暾�院茫�幢唤到�图�。�����������籯�����，�������籧����盅�匪�樘岬腞�紫外吸收值及浓度 ��角膜上皮细胞、基质细胞、羊膜为载体角膜上皮细胞����均可表达��。��上皮细胞�换�氏赴�一羊膜为载体角膜上皮细胞����������� ������������� � ��还能增加细胞钙离子浓度。��与受体结合后可迅速短暂地增加内皮细胞角膜新生血管形

7、成的机理目前尚不完全清楚，但细胞因子在其中的作用一直是人们关注的重点。生理状态下，角膜的拮抗血管形成因子和血管形成因子共同表达并维持在平衡水平，可有效避免新生血管形成。但在外伤、炎症等病理状态下，角膜血管形成因子异常增高表达，拮抗血管形成因子的表达水平不足以抑制其作用，从而引起新生血管的大量形成。 �����觥觥瘛觥觥瘛鰎，表明��可能不参与血管内皮细胞的增生和移行。�—�魑Q字⒔橹试贑�早期发达����的质粒能引起角膜和前房新生血管形成，而给予��抗体则可部分抑制情况，结果显示，正常角膜上皮和基质细胞均能表达����，进一步