蛹虫草提取物联合地塞米松抑制大鼠角膜新生血管

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1、蛹虫草提取物联合地塞米松抑制大鼠角膜新生血管【摘要】　　目的：观察蛹虫草提取物(cordycepsmilitarisextract,CME)联合地塞米松(dexamethasone,Dex)对大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法：对48只大鼠采用碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型，后随机分为3组：A组为模型对照组，B组为CME治疗组，C组为CME联合Dex治疗组。造模后每组均隔日注射给药，A组给予生理盐水结膜下注射，B组给予CME10mg球结膜下注射，C组给予CME10mg球结膜下注射，另外给予0.25g/LDex滴眼液点

2、眼，3次/d。于术后4，8，14d测量角膜新生血管的生长面积，并测量角膜组织中VEGF及其mRNA的表达情况。结果：造模后联合用药组的大鼠角膜新生血管生长面积较模型对照组及CME治疗组明显减少，差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论：CME联合Dex更能明显抑制碱烧伤所致大鼠角膜新生血管的生长。【关键词】蛹虫草提取物；地塞米松；角膜新生血管；血管内皮生长因子　　AbstractAIM:Toobservetheinhibitioneffectonratcornealneovascularizition(V)

3、bydrugbinationofthecordycepsmilitarisextract(CME)anddexamethasone(Dex).METHODS:Vmodelol/LNaOH.Fortyeightratslyaftermodeling,Aodelgroup,Bentgroup,andCentgroup.Allgroupsreceivedmedicationbysubconjunctivalinjectioneveryotherdayafteralkalineburn,groupAreceivedsali

4、ne,groupBreceived10mgCME,groupCalsoreceived10mgCME,andreceived0.25g/LDexeyedropsthreetimeseachday,eachinjectionvolumeL.Onthe4,8,14days,VRNAinthecorneaodeling,ratVofthebinationgroupodelcontrolgroupandCMEtreatmentgroup,thedifferencesoreeffectively.　　KEYE）对大鼠V具有抑

5、制作用，其高剂量与0.5g/L地塞米松(dexamethasone，Dex)的抑制作用相当。我们将CME与Dex联合用药，观察对大鼠V的抑制作用。　　1　材料和方法　　1.1　材料　　蛹虫草子实体，购自广东冬草堂虫草有限公司；0.25g/LDex滴眼液，购自湖北潜江制药有限责任公司。清洁级健康雌性SpragueDaL）于80℃热回流提取3次，每次90min。合并滤液，减压浓缩，真空干燥器内干燥至粉末，4℃保存备用。0.25g/LDex滴眼液，采用潜江制药公司生产的滴眼液原液。图1大鼠碱烧伤后14dV生长情况A：模型对

6、照组；B：CME治疗组；C：CME+Dex治疗组。　　1.2　方法　　采用100g/L水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉，所有实验大鼠均选择右眼，裂隙灯下检查眼前节无病变。10g/L地卡因眼液表面麻醉，将统一规格直径3.0mm的单层圆形滤纸浸入浓度为1mol/L氢氧化钠溶液20s，吸干滤纸上残余溶液后将其准确贴附于右眼角膜中央表面40s，取下滤纸后立即用生理盐水冲洗2min。烧伤术后即观察大鼠右眼角膜，烧灼区域呈灰白色混浊，依据评分标准[2]确认中度碱烧伤模型建立。术后术眼点红霉素眼膏预防感染。抽签法随机将大鼠分成A,

7、B,C3组（A组:模型对照组；B组：CME治疗组；C组：CME+Dex治疗组），每组15只。A组给予生理盐水0.1mL球结膜下注射。B组给予CME10mg经无菌注射用水稀释为0.1mL后行球结膜下注射。C组给予CME10mg球结膜下注射，另给予0.25g/LDex滴眼液点眼，3次/d。每组均自术日起隔日球结膜下注射，给药至处死取材为止。于术后第4,8,14d采用过量麻醉法处死大鼠,每次6只,迅速摘除眼球,在显微镜下剪下带1mm宽巩膜的角膜组织,平分为二，均置于80℃低温冰箱备用，一份用于realtimePCR检测V

8、EGF基因水平的表达，另一份用于ELISA检测VEGF蛋白水平的表达。　　1.2.1　V的定量分析　　角膜烧伤后各时间点行裂隙灯显微镜检查，测量新生血管长入角膜的长度及累及角膜圆周的钟点数，计算其面积。新生血管面积计算依据Robert公式[3]:S=C/12×3.1416[r2(rl)2],其中C代表新生血管累及角膜圆周的钟点数,l代表新生