eb病毒永生化细胞模型

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1、EB病毒永生化细胞模型在人类疾病基因研究中的应用朱振宇教授博士生导师中山大学中山医学院达安基因股份有限公司EB病毒相关人淋巴母细胞系的蛋白质表达谱研究国家自然基金30672358（负责人）1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒◆发现EB病毒是1964年Epstein与Barr在非洲儿童恶性淋巴瘤的瘤细胞中观察到的一种疱疹病毒。1966年Old等采用免疫扩散法发现鼻咽癌病人的血清能与非洲儿童淋巴细胞的抽提液起反应。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒◆证据（1）：1969年de-the从鼻咽癌活检培养的类淋巴细胞中分离出EB病毒。国

2、内也已经从鼻咽癌组织培养所建立的类淋巴母细胞株中证明带有EB病毒壳抗原（VCA）和早期抗原（EA），并在电镜下找到了典型的疱疹病毒颗粒，其形态与EB病毒相同。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒◆证据（2）：KottaridisSD等（1996年）认为鼻咽癌患者血清中抗EBNA的水平反映肿瘤的大小。[AnticancerRes,1996,16(2):785-789]Vera-SempereFJ等（1996年）采用巢式PCR和免疫组化分析说明了不论组织学类型，鼻咽癌中均有EB病毒感染。[EurJCancerBOralOncol,

3、1996,32B(3):163-168]2、几乎100%鼻咽非角化性癌均有EBV感染。在我国，几乎所有四岁以上的人群均已感染过EBV，80%以上的健康成人是EBV携带者。特别在珠江三角洲及香港地区，是世界上NPC的高发区。根据中山市的肿瘤统计资料（流行病学），NPC的年龄和性别的校正发病率为18.12/10万(男：25.60/10万；女：11.05/10万)。97%的NPC为非角化性癌。经EBER1原位杂交（所谓“金标准”）证实癌细胞中有EBV感染。一、鼻咽癌与EB病毒感染的关系小结：流行病学、血清学和分子生物学的资料证实,

4、EBV感染与NPC有密切关系。◆鼻咽癌患者癌细胞中证实有EB病毒的DNA，经原位杂交，多数癌细胞呈EBERs阳性、核抗原（EBNA-1）阳性。◆鼻咽癌患者肿瘤细胞中有EB病毒，血清有一套抗EB病毒的抗体，血清中的EBV抗体水平普遍升高。◆1997年世界卫生组织在国际抗癌联盟年会上把EBV归类为第一类致癌物（特别是鼻咽癌）。二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同◆EBV血清学诊断利用NPC的一个特征，即患者多种EBV抗体的水平较非患者高（WernerHenleetal.,1976.）。◆EBV血清学诊断已用于NP

5、C高危人群的筛查和对NPC可疑病例的诊断。根据从70年代后期以来的研究结果，VCA-IgA检测通常被用于筛查以排除NPC的诊断；EA-IgA检测目前被用于NPC的确定性检测。二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同检测哪种抗体？检测抗体哪种类型？因为鼻咽癌（NPC）是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的低分化或未分化癌。所以我们可以先了解EB病毒在上皮细胞中的潜伏感染以及两种形式的EB病毒感染所表达的各种抗原。各种抗原相应产生不同的特异性抗体中哪种有代表性？1、EB病毒的潜伏感染上皮细胞中病毒复制→循环中的B淋巴细胞池→长期

6、潜伏感染↑↑如果感染了无复制缺陷突变的病毒↑EB病毒→感染口咽上皮细胞↑如果感染了复制缺陷突变的病毒↑↓↑待上皮细胞增生后→个别细胞死亡→EB病毒引自:JImmmunol.2005;17498:4972-82、两种形式的EB病毒感染◆潜伏性感染(latentinfection)I型潜伏性感染:表达EBNA1，病征为Burkitt淋巴瘤II型潜伏性感染:表达EBNA1和LMP1、LMP2A、LMP2B，病征为Hodgkin淋巴瘤、鼻咽癌、鼻型NK/T-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤III型潜伏性感染:表达EBNA1、EBNA2、E

7、BNA3、EBNA4、EBNA5、EBNA6，病征为传染性单核细胞增多症、移植后淋巴组织增生性疾病◆溶解性感染(lyticinfection)在EBV潜伏感染的淋巴细胞中有小部分（约15%～20%）出现溶解性感染，溶解性感染出现三个时相（phase）。立即早期:表达Zta(ZEBRA)、EBNA1等早期:表达EA(D)、EA(R)、EBNA1等晚期:表达VCA、EBNA1等◆EBNA-1是在所有不同EBV感染细胞中都出现的唯一抗原。EBNA1IgA的抗体水平在NPC患者中高于正常的EBV携带者CutoffOD?小结◆NPC主

8、要表现是EBV潜伏感染伴少量溶解性感染。EBNA-1是在所有不同EBV感染细胞中都出现的唯一抗原。◆NPC是来源于鼻咽粘膜上皮细胞，检测上皮细胞的分泌型IgA抗体水平对NPC较有诊断意义。◆NPC的显著特征是病人血清中的EBV抗体（尤其是IgA亚型）水平普遍升高，这种变化在NPC发病前期将