乳铁蛋白干扰eb病毒与宿主细胞的结合及抑制eb病毒感染性炎症的机制

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：—牝学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部

2、分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：羞E亟导师日期：墟年—笸月立日博士学位论文中文摘要摘要乳铁蛋白(Lactoferrin，LF)是一种铁结合糖蛋白，属于转铁蛋白家族。乳铁蛋白主要由粘膜上皮细胞和多形核淋巴细胞产生，并分泌到乳汁、唾液、鼻腔粘膜分泌物、泪液、肠粘液、生殖道分泌物中。乳铁蛋白的生理功能广泛，包括维持铁稳态、广谱抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤等。作为一种天然免疫分子

3、，乳铁蛋白在预防病原微生物感染和抑制过度炎症反应方面发挥关键作用。EB病毒(Epstein．Barrvirus，EBV)在人类广泛传播，是单核细胞增多症的病因，并与多种肿瘤的发生密切相关，如霍奇金病、伯基特淋巴瘤和鼻咽癌。EBV具有明显的亲B细胞嗜性。EB病毒能够选择性地黏附到B细胞表面，主要是通过病毒包膜糖蛋白与B细胞表面CD21分子(EB病毒的受体)之间的交互作用；进入细胞之后，EB病毒可使B细胞永生化。上皮细胞中也可检出EB病毒，其是潜在的致癌因素。新近研究发现，EBV能直接感染单核／巨噬细胞等多种

4、免疫细胞，诱导细胞产生大量的炎症因子，在早期可起到抗感染作用，但过度的炎症反应可对器官造成损伤。我们的前期研究对l8个湖南鼻咽癌高发家系进行了单体型分析和连锁分析，发现染色体3p21为鼻咽癌易感基因区；进一步搜索和鉴定位于此区域的抑癌基因，发现编码乳铁蛋白的LF基因是重要的候选者。利用鼻咽癌组织芯片和酶联免疫吸附实验，我们发现乳铁蛋白在鼻咽癌组织中表达显著下调或缺失，其表达水平与患者血清中的EBVVCA．IgA滴度呈负相关。我们推测，乳铁蛋白的缺失或表达下调增加了EB病毒感染的几率，并加重EB病毒感染导致

5、的局部组织损伤。本课题受如下基金资助：高等学校学科创新引智计划(111计划)：111—2—12I教育部新世纪优秀人才支持计划：NCET-1卜0520国寡自然科学墓余．81171988．81071756博士学位论文中文摘要研究表明乳铁蛋白能抑制多种病毒的感染，如HCMV、HSV-1、HSV-2、HIV、HBV、HCV等。乳铁蛋白抗病毒感染的机制主要是通过其与病毒颗粒直接结合或者与靶细胞上病毒受体结合，阻止病毒吸附并进入宿主细胞。乳铁蛋白还可抑制多种病毒所致的炎症反应。但目前，仍没有乳铁蛋白抗EB病毒感染及抑

6、制EB病毒感染性炎症的报道。本研究中，我们发现乳铁蛋白具有抗EB病毒感染和抑制EB病毒感染性炎症反应的功能，并阐明了其作用机制。1．乳铁蛋白通过竞争性结合B细胞表面分子CD21，阻止EB病毒吸附并进入B细胞在病毒黏附实验中，利用免疫荧光和细胞流式术，我们发现乳铁蛋白预处理B细胞可部分抑制EB病毒与B细胞结合。定量一PCR和荧光原位杂交(FISH)证实乳铁蛋白能抑制EB病毒进入至B细胞内。EB病毒感染B细胞主要是通过EB病毒包膜糖蛋白gp350与B细胞表面CD21分子结合介导的。乳铁蛋白表面带大量正电荷，可

7、与多种生物大分子结合。其主要抗病毒机制之一是：与病毒受体结合以封闭病毒在靶细胞表面的结合位点。我们通过激光共聚焦和免疫共沉淀实验证实乳铁蛋白与EB病毒受体CD21分子存在交互作用。乳铁蛋白可能通过竞争性地结合CD21以封闭EB病毒结合位点，从而阻止EB病毒吸附并进入B细胞。2．乳铁蛋白不影响EB病毒在B细胞中的复制乳铁蛋白具有抑制～些病毒复制的功能。本研究探讨了乳铁蛋白对EB病毒复制的影响。我们用不同浓度LF分别处理P3HRl细胞和EB病毒转化的B细胞3天、6天、15天和21天，发现：乳铁博士学位论文中文

8、摘要蛋白对EB病毒在B细胞中的复制无影响。3．乳铁蛋白可抑制EB病毒由B细胞向上皮细胞的传递EB病毒有明显的亲B细胞嗜性，但它也可感染上皮细胞如鼻咽上皮细胞。目前认为，EB病毒感染上皮细胞的方式主要是通过B细胞的传递。我们利用B淋巴细胞与上皮细胞共培养的系统，通过Real．timePCR和FISH实验发现乳铁蛋白可抑制EB病毒由B细胞向上皮细胞的传递。4．乳铁蛋白通过降低NF．r,B的活性抑制EB病毒诱导的IL．8和MCP．1