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《云南红豆杉内生放线菌对半滑舌鳎病原弧菌的拮抗作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、云南红豆杉内生放线菌对半滑舌鳎病原弧菌的拮抗作用研究皿囝拦旦塑旦基弧菌是海水养殖环境中常见的一类条件致病菌,其致病性受宿主的生理状态及水质环境条件等综合因素的影响较大,随着养殖水域生态环境的恶化及养殖密度的加大,已成为海水养殖动物的主要病原菌之～.已报道的海水养殖动物病原弧菌有20多种.因此,该类疾病一直备受国内外研究工作者的关注,是海水养殖动物病害的主要研究领域之一,对于海水养殖动物弧菌病的防治研究,国内外已有较多报道.另外,各国学者在传统方法的基础上也纷纷探讨了新技术,新方法的防治效果.放线菌是自然环境中常见的一类丝状原核微生物,能产生多种抗生素.
2、在医药和农业领域中利用放线菌进行病害防治已有报道,但国内在筛选药用植物云南红豆杉(YaxusyunnanensisChengetL.内生放线菌(Endophyticactinomycetes)进行水产养殖疾病的防治方面尚未见报道,本文在半滑舌鳎病原弧菌的拮抗放线菌中进行筛选,进一步对半滑舌鳎鳗弧菌(Vibrioanguillarum)和副溶血弧茵同时具有较强拮抗作用的4株放线菌进行抗菌谱和拮抗作用的深入研究,以期为半滑舌鳎养殖病害探索一条生物防治的新路.一,材料与方法1.试验菌株①病原菌.鳗弧菌和副溶血弧菌从青岛鳌IJ_I卫镇某养殖场的患病半滑舌鳎分离
3、,并经回归感染确认为半滑舌鳎弧菌病病原.②拈抗放线菌.在半滑舌鳎病原弧菌拮抗放线菌的筛选础上,挑取对鳗弧菌和副溶血弧菌同时具较强拮抗作用的4株放线菌,编号分别为:TAR3,TAR11,FAS3~WTAS7.2.指示菌大肠杆菌,祀革杆菌,黄色葡萄球菌为本实验室保存.嗜水气单胞菌,白假丝酵母(Candidaa』bicaUS),巨大芽孢杆菌(aCUSmegaterium),鲨鱼弧菌(Vibriocarcharia,产气弧菌(Vibri0gazogenS),漂浮弧菌(Vibri0natriegen)由国家海洋局第一海洋研究所生态室惠赠.3.培养基高氏I号,营养
4、肉汤和TCBS培养基.4.固体培养基中放线茵抗菌活性测定用琼脂块法测定放线菌对2株供试病原弧菌的抑菌活性:无菌操作条件下,将被测放线菌菌株制备成菌悬液,稀释至适当的浓度后涂布高氏I号平板,在28℃条件下培养3～5天,培养后用打孔器打成直径为5毫米的琼脂块.取指示菌菌液100毫升涂布于普通琼脂平板上,待涂布均匀后,挑取打好的琼脂块反贴到己涂抹有指示菌的平板上,鳗弧菌和嗜水气单胞菌在28~C条件下培养,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在37~C条件下培养,24d',时后进行抑菌圈的观察和测量.5.液体培养基中放线菌抗菌活性测定将2种病原弧菌各自与4株拮抗放线菌分别
5、制成菌悬液,取每种菌悬液0.5毫升分别接入装有肉汤的三角瓶中,28℃水浴振荡培养,并从培养Od,时,12d'时,24小时,36d,时和48~J,时等5个不同时间的三角瓶中各取出少量菌液分别涂布于TCBS和高氏I号培养基上,在28~C下培养24小时后,用平板菌落计数法测定病原弧菌和放线菌的浓度,以不加拮抗放线菌的病原弧菌培养液为对照.6.抗菌谱的测定以大肠杆菌,枯草杆菌,金黄色葡萄球菌,嗜水气单胞菌,白假丝酵母,巨大芽孢杆菌,鲨鱼弧菌,产气弧菌,漂浮弧菌作为指示菌,用琼脂块法检测放线菌的抗菌谱.二,结果1.拮抗放线菌的抗菌谱为检测所选4株放线菌对其他菌株
6、的拮抗效果,采用大肠杆菌,枯草杆菌等6株指示菌进行抗菌谱试验.由于筛选拮抗菌的主要目的是为了抑制病原弧菌的生长,所以在抗菌谱试验中选择了较多的弧菌.在其他菌株中,大肠杆菌是Gl肠道菌的代表,金黄色葡萄球菌与枯草杆菌代表G+球菌,而嗜水气单胞菌则是水产养殖中极为常见的病原菌.表1可以看出,4株放线菌的抗菌谱TAR3,TAR1l和TAS3较宽,而TAS7的抗菌谱较窄,比较一致的是所有放线菌株都对产气弧菌具有拮抗作用.此外,TAR1I~IJTAS3对白假丝酵母和巨大芽孢杆菌具有拮抗作用.TAR3~I]TAR11菌株对金黄色葡萄球菌,嗜水气单胞菌具有拮抗作用.
7、而TAS3对枯草杆菌和漂浮弧菌的生长产生抑制作用,TAR3菌株还对鲨鱼弧菌的生长产生抑制作用,并且由表1可以看出在4株放线菌中TAS7菌株抗菌谱是最窄的.2.放线菌在固体培养基中对病原弧菌的拮抗作用表2可见,在半滑舌鳎病原弧菌拮抗放线菌的筛选基础上所选择的4株放线菌在琼脂培养基中对供试验的2株半滑舌鳎病原弧菌均有明显的拮抗作用,但它们都有各自的抑菌特点,其中菌株TAR3对副溶血弧菌拮抗效果较好,对鳗弧菌的拮抗作用稍差.而菌株TAR1l则相反,对鳗弧菌的拮抗效果较好,对副溶血弧菌拮抗效果稍差.菌株TAs3和菌株TAS7对两种病原弧菌的拮抗效果都比较明显.
8、表14株红豆杉内生放线菌的抗菌谱抑菌圈直径(厘米)指示菌株TAR3TAR11TAS3TAS7大
