植物病原真菌拮抗放线菌的筛选及其发酵条件研究

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1、独创性：声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导F进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中待鄹加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。也不包含为获得沈阳农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贞献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：巷丽欠辱时问：2006年6月眵日关于论文使用授权的说明本人完全了解沈阳农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，jF以采用影印、缩印或扫描

2、等复制手段保存、汇编学位论文。同意沈阳农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：穗b丽雉时1．BJ：2DD6年6月心日导师签名：‘拿莨移参时问：Ⅻ口歹年歹月矿同摘要本文为了适应当丽防治植物病害的发展方向．开发高效、低毒的农用抗生素，从辽宁省沈阳市、大连市及吉林省四平市等地区采集土样20份分离出放线菌，从所分离的放线菌中寻找具有高效抗真菌活性的农用抗生素，并对其菌株的分类地位、发酵条件优化、分离纯化及结构鉴定等方面进行了系统的研究，为今后的抗植物病原真菌病害的药

3、剂开发提供实践经验和理论依据。l、通过广泛筛选，获得了目的尘防菌株YZ5。利用稀释分离法从辽宁省8个地区及吉林省四平市20份样品的土壤中共分离到各种放线菌菌株156份，采用活体平板测定法共获得对植物病原真菌具有拮抗作用的放线菌菌株14株：采用杯碟法测定筛选的各菌株发酵液抑菌活性，其中发酵液抑菌圈直径超过15ram的菌株有4株。将这4株菌株进行了进一步的验证试验，结果表明，菌株YZ5无论是活体还是其发酵液对7种供试病原菌均表现较强的抑菌效果，发酵滤液稀释lO倍后对番茄叶霉病菌的抑制率达81．8％。2、利用传统分类法明确了菌株YZ

4、5的分类地位。通过对菌株YZ5的形态特征、培养特征、生理生化特性进行研究，推测YZ5属于会色类群中的龟裂链霉菌(Streptomycesrimosus)的近源变种。3、研究明确了菌株YZ5的最佳发酵条件，为Yz菌素进入中试阶段奠定了良好的基础。通过单因子试验，菌株YZ5利用碳源产抗生素从高到低依次为蔗糖>葡萄糖>淀粉>麦芽糖>乳糖：利用氮源产抗尘素以玉米粉和黄豆粉为最好，其它依次为蛋白胨、酵母粉、(NH4)2S04、氨水。通过证交试验设计，对菌株YZ5发酵条件的相关方程进行回归分析，其发酵培养基的最佳配方为蔗糖7．93％，玉米

5、粉2．23％，(NH4)2S040．233％，CaC030．442％，NaCl0．225％。选用最优化的培养基配方，菌株YZ5的最佳发酵条件为289C，150r／min，20％的接种量，起始pH值为7，发酵培养120h，菌株YZ5产素最多。YZ菌素整个发酵过程中，总糖、总氮的含量逐渐减少。4、采用Doskochilova溶剂系统、pH纸层析和纸电泳，分析认为YZ菌素属于中性抗生素；采用硅胶层析法，得到Yz菌素淡黄色粗提品；通过紫外分析和一些定性化学反应可初步判断YZ菌素可能为四烯类抗生素。稳定性试验表明，Yz菌素具有较好的酸、

6、碱、光和热稳定性。具有丌发和生产价值。关键词：农用抗生素；抗真菌：菌种鉴定：发酵条件；分离纯化AbstraetAbstractThenovelantifungalagriantibioticYZwasobtainedfromactinomycetesYZ5．Isolationofactinomycetesstrainsforbiocontrol，taxonomyofstrainTZ5，itsfermentationconditions，separationandpurificationprogressofYZwerestudi

7、edsystematically．Resultsshowedasfollows．Screeningbioeontrolstrainsisnecessarypreconditiontoobtainingagriculturalantibiotic．156aetinomycetesisolateswasseparatedfrom20soilsamples，14strainsshowedantagonismtopathogenicfungus．Antifungalactivitiesoffermentationwasmeasured

8、bymethodofcup-dish。thereare4strainswhichdiameterofinhibitionismorethan15mm．Theywereusedforthefurthertests．ItwasfoundthatbethstrainYZ5andit