拮抗放线菌06-6的筛选鉴定及其发酵条件优化-论文.pdf

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1、江苏农业科学2014年第42卷第6期·-——107-——郝永丽，宗兆锋，高博，等．拮抗放线菌06—6的筛选鉴定及其发酵条件优化[J]．江苏农业科学，2014，42(6)：107—109拮抗放线菌O6—6的筛选鉴定及其发酵条件优化郝永丽，宗兆锋，高博，胡海波，曲宝茹(1．内蒙古自治区赤峰市农牧科学研究院，内蒙古赤峰024031；2．西北农林科技大学植保学院／陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西咸阳712100)摘要：从采集的土样中分离出拮抗放线菌，并筛选出对4种靶标菌均具有明显拮抗效果的菌株06—6，对该菌株进行发酵条件优化及生理生化鉴定，从而确定该菌株的最佳发酵技术参数，通过鉴定初步将其归类为

2、灰红紫类群(Griseorubroviolaceus)。关键词：拮抗放线菌；筛选；鉴定；发酵条件；优化中图分类号：Q939．92文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)06—0107—03拮抗菌作为一种具有丰富资源的微生物类群，其产生的至、乾县、户县及山东诸城。抗生素及其他次生代谢物质在农作物病虫害生物防治方面具1．1．2供试病原菌供试靶标菌由西北农林科技大学微生有重要作用，是具有使用价值和经济价值的一类微生物，在植物实验室提供，包括番茄灰霉菌(Botrytiscinerea)、苹果炭疽物病虫害生物防治中应用前景广“J。利用拮抗放线菌产生菌(Colletotrichumgloeo

3、sporioides)、西瓜枯萎菌(Fusariumoxys—的活性物质进行真菌病害防治，具有周期短、易于研究、便于porumf．sp．nweum)和粉红聚端孢(Trichotheciumroseum)。生产、无毒害等优点。本研究旨在从采集的土样中分离筛选1．2筛选方法杀菌力强、抗菌谱广的拮抗放线菌；并对其发酵条件和分类进1．2．1菌株的分离与纯化采集的土壤过筛，研磨后称取行研究，为优势拮抗放线菌在生物防治中的应用奠定基础。0．1g样品，制备成不同浓度的稀释液]。用移液器吸取特定稀释浓度的液体20，滴在高氏培养基表面，涂匀。将皿1材料与方法倒置于28℃培养箱中培养，几天后从皿内分离出单菌落，用

4、1．1材料显微镜检纯化，保存于G氏斜面中。1．1．1土样来源试验用土壤标本分别采集于陕西商洛、周1．2．2拮抗放线菌的筛选用打孔器将培养好的放线菌菌苔打成直径5mm的菌饼置于PDA平板中间，3d后将同样大收稿日期：2013—09—25小的4种供试病原真菌菌饼对峙接于两侧，2l℃下培养，观基金项目：教育部创新团队发展计划(编号：200558)；国家高等学校察并测量抑菌圈的大小。将初筛得到的菌株于SNB培养液学科创新引智计划(编号：B07049)。中振动培养，发酵液离心后取上清液，采用微孔扩散法测定发作者简介：郝永丽(1981一)，女，内蒙古赤峰人，硕士，助理研究员，从酵液及发酵滤液的抑菌活性，供

5、试靶标菌为西瓜枯萎菌。事园艺植物病虫害防治研究。E—mail：yonglihao1981@163．com。据报道，芽孢杆菌属的一些种类对外界有害因子的抵抗力强，endophytesintheagriculturalcrops[J]．CanadianJournalofMicro—菌体生长过程中产生的枯草菌素、制霉菌素等多种活性物质biology，1997，43(10)：895—914．对植物病原菌有明显的抑制作用J。苏云金芽孢杆菌B．[2]KiersET，DenisonRF．Sanctions，cooperation，andthestabilityofplant—rhizospheremutua

6、lisms[J]．AnnualReviewofEcdogy，Evo—thuringiensis由于能产生6内毒素，对鳞翅目等昆虫的幼虫有lution，andSystematics，2008，39：215—236．毒杀作用而被用以制造生物农药，是常用的生防资源菌。[3]RyanRP，GermaineK，FranksA，eta1．Bacterialendophytes：recent芽孢杆菌属、假单胞菌属、类芽孢杆菌属的许多菌株不仅可以developmentsandapplications[J]．FEMSMicrobiologyLetters，分泌吲哚乙酸或赤霉素等，从而有效促进植物的生长，而且能2

7、008，278(1)：1—9．抑制多种病原菌的活性，从而显著提高植物的抗病性。[4]牛西午．中国锦鸡儿属植物资源研究——分布及分种描述[J]．作为防风固沙的先锋物种，小叶锦鸡儿的生态学意义远西北植物学报，1999，19(5)：107—133．大于其经济学意义，发掘与其共生的微生物资源不仅对探索[5]WeisburgWG，BarnsSM，Pdl~ierDA，eta1．16SribosomalDNA极