抗真菌拮抗放线菌的筛选及摇床发酵条件的优化

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1、维普资讯http://www.cqvip.com12微生物学杂志2004年7月第24卷第4期JOURNALOFMICROBIOLOGYJuly2004Vo1．24No·4·研究报告·抗真菌拮抗放线菌的筛选及摇床发酵条件的优化刘翠娟，段琦梅，安德荣(1．西北农林科技大学植保学院，陕西杨凌712100；2．西北农林科技大学生命科学院，陕西杨凌712100)摘要从陕西渭北旱原的土壤中分离到1株对水稻稻瘟、小麦赤霉、棉花枯萎、小麦根腐、小麦全蚀、梨黑星等多种植物病原真菌拮抗性好的放线茵。对其进一步纯化后，进行发酵条件的优化，认为选用12号培养基，pH8．0，培养72h，30

2、～34℃，150r／min条件为最佳。关键词放线茵；筛选；发酵；优化中圈分类号Q939．9文献标识码A文章编号1005—7021(2004)04—0012—03植物病原真菌引起的植物病害是植物的第一释液0．05mL，加入已做好的高氏1号培养基平大病害，每年给粮食生产造成巨大的损失。目前板上．用灭菌的玻璃刮刀将稀释液均匀涂布开。对植物病害的防治普遍采用化学农药，而化学农放入28℃恒温箱中培养。设3个重复。③挑菌t药对非靶标生物的毒害、对环境的污染、使害物产根据形态将放线菌挑人高氏1号斜面上培养7d生抗药性的问题至今仍难以解决，生物防治的方后保存。法被认为是一条有效的途

3、径。本研究针对几种主1．2．3拮抗放线茵的筛选放线菌发酵液拮抗要的植物病害从土壤中筛选拮抗放线菌，并对其性测定：将放线菌接入发酵培养基，恒温水浴摇床发酵条件进行优化，以此可作为工业液体发酵的培养，30℃，培养3d后，60℃水浴15min，用草参考。酸调pH到3．5。静置1h后过滤，收集滤液。取3mL发酵滤液注入培养皿中，将熔化的PDA培1材料与方法养基与发酵液(约7：1)混合均匀，冷却后接病原1．1材料菌的菌饼。加蒸馏水和草酸作对照。用生长速率1．1．1土样本试验采用的分离用土样采自陕法计算抑制率。由抑制率判断放线菌对病原菌拮西渭北旱原。抗作用的强弱。1．1．2供试

4、病原茵小麦全蚀病菌(Geauman—1．2．4单胞分离将放线菌的孢子制成孢子悬nomycesgraminis)、稻瘟(iculariaoryzae)、麦浮液，孢子悬浮液稀释后用平板涂抹法制成单胞类赤霉菌(Fusariumgraminearum)、棉花枯萎菌落。培养7d后挑入高氏1号斜面上保存。并(Fusariumoxysporum)、梨黑星(Fusicladium用生长素率法继续筛选单胞菌。Pirinum(z．)Fucke1)、小麦根腐(Bipolaris1．2．5发酵培养基的选择本研究采用16种不sorokiniana)。同的发酵培养基(表1)，30℃培养3d，以

5、稻瘟菌1．1．3培养基分离筛选用培养基：高氏1号；作为供试的病原菌，生长速率法计算抑制率来表拮抗试验用培养基：PDA；发酵试验用培养基：通示不同培养基中的抗生素的累积量。用大豆玉米浸汁液体培养基。1．2．6测定发酵时间、培养基pH、温度及摇床转1．2方法速对发酵滤液抑茵作用的影响1．2．1采集土样选好采集地点后，铲去表层2结果与分析土，用取样器取规定深度的土样，装入无菌牛皮纸袋中，带回实验室阴干后立即分离。2、1高拮抗菌株的筛选1．2．2放线茵的分离①称取1g研磨好的土本研究共对240株放线菌的发酵液进行初筛壤，制备稀释成10，10，10，10倍的土壤悬浮液和复筛后

6、，得到5株较好的菌株，再对这5株的抑备用。②采用涂抹法分别取上述4个浓度土壤稀菌率进行比较，结果见表2。其中以159号抑菌收稿日期：2003—06—10作者简介：刘翠娟女。硕士研究生。主要从事微生物学及土壤拮抗微生物的研究。维普资讯http://www.cqvip.com3456789mnH4期刘翠娟等：抗真菌拮抗放线菌的筛选及播床发酵条件的优化132淀粉14g，乳糖16g，黄豆粉10g，磷酸氢二钾3g，碳酸钙4g，氯化钾0．4g，水1000mL葡萄糖4g，鱼粉6g，黄豆粉16g，硫酸饺2g，碳酸钙4g，水1000mL玉米粉35g，黄豆粉20g，硝酸钾5g，碳酸钙4

7、g，水1000mL麦麸40g，花生粉饼25g，酵母粉5g，磷酸氢二钾0．2g，水1000mL蛋白胨10g，蔗糖30g，磷酸氢二钾0．5g，硫酸亚铁0．01g，水1000mL葡萄糖2g,酵母膏2g，牛肉膏3g，蛋白胨2g，甘油20g，黄豆饼粉20g，硫酸镁0．5g，磷酸氢二钾lg，水1000mL玉米粉40g，麸皮10g，麸质粉5g，硫酸铵lg，磷酸氢二钾lg，碳酸钙4g，葡萄糖10g，水1000mL淀粉40g，酒石酸氨8．5g，氯化钠3g，磷酸氢二钾3g，硫酸镁lg，硫酸锌lg，豆油4mL，水1000mL糊精15g，黄豆粉30g，硫酸镁0．5g，碳酸钙10g，水1