养殖对虾病原性弧菌拮抗菌的筛选和效果评价

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1、学校代码：10264研究生学号：M120104126上海海洋大学硕士学位论文养殖对虾病原性弧菌拮抗菌的筛题目：选和效果评价ScreeningandevalutionofBacillusspp.英文题目：againstvibriodiseaseinshrimpaquaculture专业：临床兽医学研究方向：水生动物病害防控姓名：张盛静指导教师：宋晓玲研究员二O一五年五月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的

2、成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本

3、学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会人员名单姓名工作单位职称是否硕士导师备注相建海中科院海洋所研究员是主席孙黎中科院海洋所研究员是委员战文斌中国海洋大学教授是委员张士璀中国海洋大学教授是委员张晓华中国海洋大学教授是委员李晨黄海水产研究所工程师否秘书2015年6月3日上午答辩日期答辩地点黄海所1号楼3楼会议室9:00，下午1:30养殖对虾病原性弧菌拮抗菌的筛选和效果评价摘要第一部分：人工养

4、殖对虾可培养细菌数量及组成分析。为深入了解人工养殖条件下养殖对虾肠道内菌群结构和携带病毒情况，本部分应用常规细菌分离、培养与纯化，细菌16SrDNA序列分析的方法分析了我国山东、江苏、韩国不同养殖场的凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）和中国明对虾（Fenneorpenaeuschinensis）肠道内可培养细菌的总数、优势菌组成和数量，并用巢式聚合酶链式反应(Nestedpolymerasechainreaction,NestedPCR)方法检测对虾携带病毒情况。结果显示各批次凡纳滨对

5、虾和中国明对虾对虾样品肠道内的可培养细菌总数在5910-10cfu/g之间，并对分离出的优势菌进行属（种）鉴定，结果表明这些优势菌分别属于乳球菌属（Lactococcussp.）、弧菌属（Vibriosp.）、芽孢杆菌属（Bacillussp.）、发光杆菌属（Photobacteriumsp.）、希瓦氏菌属（Shewanellasp.）、节杆菌属（Arthrobactersp.）、微小杆菌属（Microbacteriumsp.）。凡纳滨对虾和中国明对虾均有样品检测为WSSV阳性，6批次WSSV阳性对虾样

6、品中均检测到弧菌属细菌，占可培养细菌比例为33%-93.58%。2批次WSSV阳性对虾样品中检测到希瓦氏菌属细菌，占可培养细菌比例为21.67%-34.21%。4批次WSSV阳性对虾样品中检测到发光杆菌属细菌，占可培养细菌比例为21.03%-66.83%。第二部分：抗哈维氏弧菌芽孢杆菌的筛选及其效果的研究。采用滤纸片法和共培养的方法筛选出4株芽孢杆菌对哈维氏弧菌有明显拮抗作用。4株芽孢杆菌的编号分别为2012070203、2011120601、20110910012和2013103110，由本实验室分离

7、鉴定保存。对4株芽孢杆菌进行16SrDNA序列分析，分析相关细菌相应序列的同源性，构建系统发育树。结合细菌表型特征以及16SrDNA序列分析最终鉴定结果为：2012070203为蜡样芽孢杆菌，2011120601为地衣芽孢杆菌，20110910012为短小芽孢杆菌，2013103110为巨大芽孢杆菌。将4株已鉴定的芽孢杆菌分别添加到饲16料中，配制成4种实验饲料，投喂凡纳滨对虾21d后，注射哈维氏弧菌5.98×10cfu/ml观察14d，14d后对照组的累计死亡率为100%，蜡样芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌实

8、验组的累计死亡率分别为91.11%和95.55%，与对照组无显著差异(P>0.05)。地衣芽孢杆菌和短小芽孢杆菌实验组的累计死亡率分别为77.78%和84.44%，显著低于对照组(P<0.05)。第三部分：1株地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）对凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）肠道菌群和非特异免疫基因表达量影响的研究。实验对虾和感染实验同第二部分，其中对照组每日投喂普通商品饲料，实验组每日投喂在普