利用内标为基础的多重 rt-pcr 技术检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒

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1、利用内标为基础的多重+RT-PCR+技术检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒浙江农业学报ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＺｈｅｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ，２０１４，２６（１）：１０５－１０９学报，２０１４，２６（１）：１０５－１０９．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｚｊｎｙｘｂ．ｃｎ王红，王菁菁，张科立，等．利用内标为基础的多重ＲＴ－ＰＣＲ技术检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒［Ｊ］．浙江农业１５２４畅２０１４畅０１畅１９ＤＯＩ：１０畅３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－利用内标为基础的多重ＲＴ－ＰＣＲ技术检测草莓

2、斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒王　红，王菁菁，张科立，成卓敏（宁波华厦现代农业研究所，浙江宁波３１５０００）摘　要：草莓斑驳病毒（ＳＭｏＶ）和草莓轻型黄边病毒（ＳＭＹＥＶ）分布较广，危害较重。应用ＣＴＡＢ法提取草莓总ＲＮＡ，以优质的草莓总ＲＮＡ为模板，结合扩增内标的检测体系，建立了ＳＭｏＶ和ＳＭＹＥＶ的多重ＲＴ－ＰＣＲ检测体系，可以对草莓田间植株和试管苗进行快速稳定的病毒检测。关键词：草莓病毒；内标；多重ＲＴ－ＰＣＲ；病毒检测中图分类号：Ｓ４３６畅６３９———————————————————————

3、——————————————————————————————　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－１５２４（２０１４）０１－０１０５－０５ＷＡＮＧＨｏｎｇ，ＷＡＮＧＪｉｎｇ－ｊｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＫｅ－ｌｉ，ＣＨＥＮＧＺｈｕｏ－ｍｉｎＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓａｎｄＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｍｉｌｄｙｅｌｌｏｗｅｄｇｅｖｉｒｕｓｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｘＲＴ－ＰＣＲｂａｓｅｄｏｎｉｎｔｅｒｎａｌｃｏｎｔｒｏｌ（ＮｉｎｇｂｏＨｕａＳｈａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓ

4、ｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎｉｎｇｂｏ３１５０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓ（ＳＭｏＶ）ａｎｄＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｍｉｌｄｙｅｌｌｏｗｅｄｇｅｖｉｒｕｓ（ＳＭＹＥＶ），ｗｈｉｃｈａｒｅｆｏｕｎｄｗｏｒｌｄ－ｗｉｄｅ，ｃａｎｃａｕｓｅｓｅｒｉｏｕｓｃｒｏｐｌｏｓｓｅｓ．ＴｏｔａｌＲＮＡｆｏｒｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）ｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｗ

5、ｉｔｈＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄ．ＡｍｕｌｔｉｐｌｅｘＲＴ－ＰＣＲａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｓｉｍｕｌ—————————————————————————————————————————————————————ｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｎｇＳＭｏＶｄｅｔｅｃｔｅｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｖｉｒｕｓ；ｉｎｔｅｒｎａｌｃｏｎｔｒｏｌ；ｍｕｌｔｉｐｌｅｘＲＴ－ＰＣＲ；ｖｉｒｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄＳＭＹＥＶｂａｓｅｄｏｎｎｄｈＢｇｅｎｅａｓｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｌ

6、ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｂｏｔｈｆｉｅｌｄｐｌａｎｔｓａｎｄｔｅｓｔ－ｔｕｂｅｐｌａｎｔｌｅｔｓｏｆｓｔｒａｗｂｅｒｒｉｅｓｗｅｒｅ　　草莓是多年生草本植物，因其果实色泽鲜艳、营养丰富、酸甜可口、效益可观而备受栽培者和消费者喜爱，有“水果皇后”的美誉。在浙江省，草莓是一项非常重要的农业特色优势产业。长期以来，草莓产区一直都依靠传统的匍匐茎繁殖法，草莓上多种病毒随无性繁殖不断增殖扩大，致使草莓种性退化，长势减弱，产量逐年下收稿日期：２０１３－０３－１８基金项目：农业科技成果转化资金项目（ＳＱ２０１２ＥＣＣ

7、２２０００８）作者简介：王红（１９８７—），女，山东临沂人，硕士，研究方向为植物病理学，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｏｃｏ９６８１２＠１６３．ｃｏｍ降。侵染草莓的病毒据统计有２０多种，很多病毒在商品草莓上不会诱发明显的症状，侵染后通常仅表现在失去活力、植株矮化产量低，以及通—————————————————————————————————————————————————————［１］常意义上的品种“退化”。影响草莓的主要蚜传病毒有草莓斑驳病毒（ＳＭｏＶ）和草莓轻型黄边［２，３］病毒（ＳＭＹＥＶ），它们分布较

8、广，危害较重。解决病毒危害的关键是大面积推广应用无病毒苗，实行无病毒化生产。病毒检测是草莓病毒研究的一个重要环节，其水平的高低必将影响无病毒化生产的进程。以往草莓病毒检测的方法主要有小叶嫁接法、电镜观测和酶联免疫吸附?１０６?［４，５］浙江农业学报　第２６卷　第１期（２０１４年１月）法，但均存在局限性。ＰＣＲ技术是病毒检测的主要方法之一，目前已有利用多重ＰＣＲ技术对这［６－８］两种病毒进行检测的报道。多重ＰＣＲ（Ｍｕｌｔｉ－ｐｌｅｘｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）是在１次ＰＣＲ反