轮状病毒星状病毒和甲型肝炎病毒的单管多重荧光定量RT-PCR检测方法研究.pdf

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1、·358·浙江预防医学2015年4月第27卷第4期ZhejiangPreyMed，Apr．2015，Vol27．No．4·论著·轮状病毒星状病毒和甲型肝炎病毒的单管多重荧光定量RT—PCR检测方法研究徐德顺：朱晓娟，陈莉萍，吴晓芳，纪蕾湖州市疾病预防控制中心，浙江湖州313000摘要：目的建立能同时检测星状病毒、轮状病毒和甲型肝炎病毒的单管多重荧光定量RT—PCR方法。方法根据GenBank上下载的上述3种病毒基因组保守序列设计引物和探针，建立并分析多重荧光RT—PCR的重复性、特异性和敏感性；以所建立方法对128例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测，同时以基因测序进

2、行验证。结果所建立的多重荧光RT—PCR检测方法对轮状病毒、星状病毒和甲型肝炎病毒具有很好的特异性和重复性，轮状病毒灵敏度达到1O拷贝，星状病毒和甲型肝炎病毒灵敏度达到10拷贝。128份粪便标本中，轮状病毒和星状病毒的检出率分别为17．97％和3．13％，甲型肝炎病毒未检出。与基因测序比对结果相符。结论用于轮状病毒、星状病毒和甲肝病毒的单管多重荧光定量RT—PCR方法快速、特异且灵敏，可用于临床病原诊断和流行病学调查。关键词：星状病毒；轮状病毒；甲型肝炎病毒；逆转录聚合酶链反应中图分类号：R373．2文献标识码：A文章编号：1007—0931(2015)04—03

3、58—04Astudyonthesingle——tubemultiplexRT——realtimePCRassayindetectingrotavirus，astrovirusandhepatitisAvirusXUDe—shun，ZHUXiao—juan，CHENLi—ping，WUXiao—fang，JILeiTheCenterforDiseaseControlandPreventionofHuzhouCity，Huzhou，Zhefiang，313000，ChinaAbstract：ObjectiveTodevelopandevaluateasingle——

4、tubemultiplexRT——realtimePCRassayforthesimuhaneousdetectionofrotavirus，astrovirusandhepatitisAvirus．MethodsGen—banksequencesofrotavirus，astrovirusandhepatitisAviruswereincludedasreferencesequences．PrimersandprobesweredesignedbasedOnthereferencesequences．Amultiplexreal—timeRT—PCRassayw

5、asdeveloped，andthereproducibility，specificityandsensitivityoftheassaywereevaluated．Fecalsamplesfrom128patientswithviraldiarrheaweredetectedandverifiedbygenesequencing．ResultsTherewashighreproducibilityandspecificityofthesingle—tubemuhiplexreal—timeRT—PCRassayfordetectingrotavirus，astr

6、ovirusandhepatitisAvirus．Detectionlimitsof10copieswereachievedintestsofrotavirus，10CopiesforastrovirusandhepatitisAvirusinonereaction．3．13％and17．97％of128clinicalspecimensweredetectedpositiveforastrovirusRNAandrotavirusRNArespectively．Andthepositivesampleswereverifiedbygenesequencing．C

7、onclusionRotavirus，astrovirusandhepatitisAviruscanbedetectedandidentifiedbythesingle～tubemultiplexRT—realtimePCRassaywithhighspecificityandsensitivity．Theassaydevelopedinthisstudycanbeappliedtotheclinicaldiagnosisandepidemiologiealinvestigation．Keywords：Astrovirus；Rotavirus；HepatitisA

8、virus