靶向线粒体转录因子a大鼠活体rna干扰实验和建立动物模型的论文

《靶向线粒体转录因子a大鼠活体rna干扰实验和建立动物模型的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、靶向线粒体转录因子A大鼠活体RNA干扰实验和建立动物模型的论文靶向线粒体转录因子A大鼠活体RNA干扰实验和建立动物模型的论文【摘要】目的：在体外构建并筛选出靶向线粒体转录因子a（tfam）的有效rna干扰慢病毒载体，用于大鼠整体rnai实验，观察其对肝组织中目的基因表达的干扰效果。方法：设计4条sirna序列并合成双链dnaoligo，制备目的基因rna干扰慢病毒载体，体外感染目的细胞，利用rt-pcr和westernblot的方法检测目的基因tfam的表达情况，从而筛选出有效的干扰靶点。构建大鼠

2、活体rnai动物模型，观察大鼠肝脏中靶基因表达的变化情况。结果：酶切鉴定及测序结果均提示sirna序列成功连接入载体中。rt-pcr结果提示3号靶点的干扰效率最高，达到了55％左右，westernblot也验证了其干扰的有效性。大鼠活体rnai结果显示，肝脏中目的基因的表达也明显减少，这种表达减弱具有特异性和靶向性。结论：tfam靶向rna干扰慢病毒载体构建成功，能有效抑制目的细胞中线粒体转录因子a的表达。构建的慢病毒载体在大鼠活体内也具有良好的干扰效果。该研究为下一步利用此慢病毒载体进行活体rn

3、a干扰打下了基础。【关键词】靶向线粒体转录因子a·rna干扰·慢病毒载体·模型，动物·大鼠，wistarestablishmentofexperimentalaminalmodelofrnaiinvivousinglentivirus-sirnavectorsystemtargetingtfamlinheng,tangchun,wuqiao,fengchun-lin,zhangyu-jun,biepinghepatobiliarysurgeryinstitute,southwesthospital

4、,thirdmilitarymedicaluniversity（chongqing400038,china）【abstract】objective:toconstructarebinantlentivirusvectorofrnainterferencetargetingmitochondrialtranscriptionfactora（tfam）geneandtoselectthemostefficientsmallinterferingrna（sirna）tosuppresstfamintar

5、getcells,andtousetheselectedlentivirusvectorinvivoandtoanalyzeitsefficacy.methods:accordingtogenbankinformationoftfam,foursirnaanddoublestranddnaweredesigned,synthesizedandinsertedintothelentivirusvector.therebinantlentivirusvectorsystemwasconfirmedby

6、pcrandsequencing,thenitwasusedtotransfectthetargetcells.thechangeoftfamexpressionwasdeterminedbypcrandwesternblot.themostefficientlentivirusvectorwasselectedandusedinvivo.thechangeoftfamexpressioninliverwasassessed.results:theresultsofenzymedigestiona

7、ndsequencingshowedthattherebinantlentivirusvectorwasconstructedsuccessfully.theresultofrt-pcrshowedthattarget3#hadthehighestinterfering.efficiency（about55%）andwesternblotanalysisconfirmeditsefficacy.theresultofrnaiinvivoalsoproveditsefficiency.conclus

8、ion:therebinantlentivirusvectorofrnainterferencetargetingtfamhasbeensuccessfullyconstructed.itcaneffectivelysuppresstfamexpressioninvitroandinvivo.【keywords】mitochondrialtranscriptionfactora·rnainterference·lentiviralvector·rats,wistarrna干扰（rn