第二章微生物的纯培养和显微摄影技术

《第二章微生物的纯培养和显微摄影技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第二章微生物的纯培养和显微技术微生物的分离和纯培养显微镜和显微技术本讲结束本讲结束培养物————在微生物学中，在人为条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物（culture)。纯培养物————只有一种微生物的培养物称为纯培养物，又称纯培养（pureculture)如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养.在进行菌种鉴定及生产应用时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化一、无菌技术二、用固体培养基分离纯培养三、用液体培养基分离纯培养四、单细胞（单孢子）分离五、选择培养分离六、二元培养物七、微生物的保藏技术返回在分离、转

2、接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术（aseptictechnique)一、无菌技术1、微生物培养的常用器具及灭菌2、接种操作将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种1.接种针2.接种环3.接种钩（1）接种工具4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀（2）接种方法A、划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。B、三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让

3、它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的C、穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长D、混浇接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落E、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌

4、液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。F、液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种G、注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病H、活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是

5、发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。(3)无菌操作培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具

6、必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。菌落———单个

7、微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落菌苔————但固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。平板———熔化的固体培养基到入无菌平皿，冷却后，盛有固体培养基的平皿。1、稀释倒平皿法2、涂布平板法3、平板划线分离法4、稀释摇管法返回1、稀释倒平皿法首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次