粘红酵母delta-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达-应用与环境生物学报

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1、粘红酵母∆12-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达收稿日期Received:接受日期Accepted:资助：国家自然科学基金项目(No.31160016)，云南省应用基础研究基金资助项目(No.KKSA201126005)、教育部回国人员科研启动基金(No.KKQA201226003)资助.SupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(31160016),theApplicationandBasicResearchFundofYunnanPro

2、vince(KKSA201126005),theScientificResearchFoundationforReturnedOverseasChineseScholars,StateEducationMinistryofChina.(KKQA201226003)**通讯作者Correspondingauthor(E-mail:qzhang37@gmail.com)杨晓霞，何仕武，魏云林，林连兵，季秀玲，张琦**昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500摘要Δ12-脂肪酸脱氢酶一般特异性在18C

3、油酸第12碳原子引入双键转变成亚油酸。为了从粘红酵母YM25079中克隆全长Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列，本研究参考已知的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列设计基因特异性引物，通过PCR扩增获得到全长为1353bp的cDNA序列，序列分析结果表明该序列具有一个编码450个氨基酸的一个完整开放阅读框，所编码蛋白质的大小为50.9KD。与报道的Δ12-脂肪酸脱氢酶一样，推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区，表明该序列为一个新的编码Δ12-脂肪酸脱氢酶的基因。为了验证其功能，把开放阅读

4、框序列亚克隆到表达载体pYES3/CT，构建重组表达载体pYRGD12，并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达。通过脂肪酸气相色谱(GC)分析表明，该序列所编码的蛋白质具有Δ12-脂肪酸脱氢酶活性，能将油酸转化为亚油酸，亚油酸的含量占酵母总脂肪酸的4.31%。关键词粘红酵母；Δ12-脂肪酸脱氢酶；亚油酸；克隆和表达CLCQ933CloningandheterologousexpressionofaΔ12-desaturasegenefromRhodotorulaglutinis*YANGX

5、iaoxia,HEShiwu,WEIYunlin,LINLianbing,JIXiuling&ZHANGQi**FacultyofLifeScienceandTechnology,KunmingUniversityofScienceandTechnology,Kunming650500,ChinaAbstractObjectives:∆12-fattyaciddesaturasegenerallyintroducesanewdoublebondspecificallyatΔ12positionof1

6、8Coleicacidtogeneratelinoleicacid.Thisstudyistoclonethefull-length∆12-fattyaciddesaturasegenefromRhodotorulaglutinisstrainYM25079.Methods:Basedonthesequenceinformationoftheknownyeast∆12-fattyaciddesaturasegenes,apairofspecificprimerswasdesignedandusedf

7、ortheamplificationofYM25079∆12-fattyaciddesaturasegene.TheobtainedsequencewasfurthertransformedintoSaccharomycescerevisiaestrainINVSclforfunctionalanalysis.Results:Afull-lengthcDNAsequenceof1353bpwasamplifiedfromRhodotorulaglutinisYM25079.Sequenceanaly

8、sisshowedthissequencecomprisedanopenreadingframeencoding458aminoacidsof50.9KD.Thededucedamino-acidsequenceshowedsimilaritytotheknown∆12-fattyaciddesaturaseswhichcomprisethreecharacteristicconservedhistidine-richregionsforthemembrane-bou