资源描述：
《一起家庭内hiv-1感染分子流行病学探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、一起家庭内HIV-1感染分子流行病学探究摘要：［目的］采用现场流行病学和分子流行病学相结合的方法，以阐明家庭内成员HIV-1病毒传播关系。［方法］通过定性流行病学，调查一家庭内各成员有关HIV-1感染及其相关因素，并应用巢式RT-PCR扩增HIV-1pol区和env区基因，经DNA测序后用遗传进化系统树比对的方法，结合现场调查资料进行综合分析。［结果］该家庭中3人HIV感染毒株亚型均为CRF07-BC。3个病例毒株的基因同源性高达99％和98％，且克隆基因差异较小，父母之间的基因克隆进化关系成立，但父子之间的进化关系明显大于母子的关系。3人
2、与耐药相关基因突变位点分布情况基本一致，但在A71T位点上的突变率以儿子最高（100％），父亲其次（83％），母亲则未发生突变。［结论］该家庭中母亲是感染了父亲的部分尚未发生变异的病毒株，儿子则感染了父亲体内的变异株，初步提示为家庭内个人密切接触的HIV感染。关键词：HIV-1；家庭内感染；流行病学中图分类号：R512.91文献标识码：Ａ15众所周知，HIV-1是通过性接触、血液（针刺吸毒或使用血液及血液制品）以及母婴途径传播。绝大多数研究发现，家庭内的密切接触与HIV-1病毒的感染无关［1~4］。但是有报道证明了一些特殊的情况也可造成HI
3、V-1病毒的传播［5~8］，包括可能有家庭内的传播［9~13］。本次研究特别关注1例无性接触、明显的血液接触和母婴途径而感染HIV-1的病例，并运用分子流行病学的证据证明病毒是从家庭内1位成员传播而来。1材料与方法1.1流行病学调查在知情同意的前提下，对一感染HIV-1的家庭中3位成员进行咨询访谈。调查内容主要包括调查对象的人口社会学特征、感染HIV的可能途径、发病的症状和治疗情况等。1.2实验室检测3位病人的血样在采集后24h内送往本中心实验室，实验测定项目包括CD4细胞计数、HIV-1病毒载量检测、基因亚型分析和耐药突变测定。1.2.1
4、CD4�＋淋巴细胞计数流式细胞仪(美国BECTONDICKINSON公司)测定CD4、CD8、CD3T淋巴细胞绝对值。将20μLCD4/CD8/CD3TRITEST试剂加入CD4绝对计数管中，加入50μL抗凝血，室温避光15min，加入免洗溶血素450μL，室温避光15min，用FACSMULTISET软件检测并进行自动分析。1.2.2病毒载量测定采用核酸序列扩增实验（EasyQNASBA）。严格按试剂说明书操作。1.2.3基因亚型和耐药位点突变分析15①血浆HIV-1RNA提取：使用离心柱吸附RNA分离方法（QIAamp�viralRNA
5、minikit，QIAGEN）提取RNA，-80℃冻存。②HIV-1RNA逆转录巢式PCR（RT-PCR）：使用RNA逆转录和PCR一步法扩增试剂（TitanOneTubeRT-PCRSystem,RocheDiagnosticsGmbH，Germany）和PCR扩增试剂（ExpandHighFidelityplusPCRSystem,RocheDiagnosticsGmbH，Germany）。③RT-PCR逆转录扩增反应：pol区引物SHP1(5’-TGGAAATGTGGAAAGGAAGGAC-3’,HIV-1HBX2,2027-2050
6、)和SHP2(5’-CTGTATTTCTGCTATTAAGTCTTTTGATGGG-3’,HIV-1HBX2,3509-3539),env区引物ED5和ED12［14］，各0.5μL(20mmol/L),MgCl�21.5μL(25mmol/L),5x缓冲液5μL,dNTP混合液0.5μL(10mmol/L),DTT�1.25μL，RNA酶抑制剂0.25μL，酶混合物0.5μL�(5U/μL),DEPC水12μL,RNA模板3μL，反应终体积为25μL。反应条件为：48℃45min,94℃2min；�94℃30s,55℃30s,68℃2.5
7、min,35个循环；68℃延伸�10min，4℃保温(热循环仪,GeneAmp�PCRSystem9700,AppliedBiosystems)。④第二轮PCR扩增：pol区引物SHP3（5’-CAGAGCCAACAGCCCCACCA-3’，HIV-1HBX2,152147-2166）和SHP4(5’-CTTCTGTATATCATTGACAGTCCAGCT-3’，HIV-1HBX2,3326-3330），env区引物ES7和ES8［14］,各1μL(20mmol/L),5x缓冲液10μL,MgCl�23μL(25mmol/L),dNTP混合
8、液1μL(10mmol/L)，DNA聚合酶0.5μL（5U/μL）,DEPC水28.5μL，第一轮PCR产物5μL,反应终体积50μL。反应条件：94℃5min；94℃5s,55
