衢州地区宫颈病变患者HPV感染分子流行病学研究

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1、衢州地区宫颈病变患者HPV感染分子流行病学研究［摘要］目的分析衢州地区1280例宫颈病变女性中人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)21种基因型的分子流行病学特点。方法对衢州地区1280例宫颈病变的女性进行21种HPV基因型分型检测,比较不同基因型的流行病学特点。结果本组病例中总HPV感染率为55.31%(708/1280),其中HR-HPV感染率为38.83%,LR-HPV感染率为16.48%,高危型最常见类型为HPV16、58、52,低危型最常见类型为HPV6、11。HR-HPV亚型中16、58、52是主要的

2、独立影响因素，而LR-HPV亚型中6、11是主要的影响因素。HPV单一型感染率11.1%,两种亚型合并感染率42.9%,三种亚型合并感染率30.6%,四种及以上亚型合并感染率15.4%o不同年龄段感染HPV及感染HR-HPV的比例均有显著性差异，最高为31〜40岁组，分别占67.39%和50.58%,其次为21〜30岁组，分别占61.75%和45.78%,HPV感染与宫颈病变程度呈正相关。结论本研究提供了衢州地区宫颈病变女性的21种HPV基因型分子流行病学资料，为本地区宫颈癌的临床防治工作提供了可靠的科学依据，对本地区今后疫苗的开发、应

3、用也具有重要价值。［关键词］HPV；基因型；高危型；宫颈病变［中图分类号］R737.33［文献标识码］B［文章编号］1673-9701(2012)32-0011-03宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，流行病学调查和分子生物学研究均已证实人乳头瘤病毒(HPV)感染是引起宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要原因，其中高危型HPV(HR-HPV)感染被认为是引起宫颈癌的最重要因素［1］。目前已发现的HPV亚型共有100多种，但能从被感染生殖道中分离出的亚型仅30多种［2］,不同种族、不同地区、不同的研究人群其感染的HPV亚型分布也有所不同［3］。

4、衢州市因地属浙西山区，女性宫颈病变的发病率一直较高，已严重影响到本地区女性的生殖健康和生命安全，因此，我们对本地区宫颈病变的女性进行HPV感染分子流行病学调查，旨在为本地区HPV感染防治措施的制度以及今后HPV疫苗的使用提供依据，现报道如下。1资料与方法1.1一般资料2009年1月〜2010年12月间来我院妇科门诊就诊时自愿做TCT宫颈疾病筛查的患者共17578例，其中1280例患者TCT诊断为不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)及以上，对该部分患者均进行了HPV病毒检测，并在阴道镜下行多点活检组织病理学确诊，同时行相关流行病

5、学调查分析。该组患者年龄27〜56岁，平均(43.8±21.4)岁，最终经病理确诊为炎症846例、湿疣104例、CINI237例、CINII和III共92例、鳞癌1例。1.2试剂和仪器采用香港凯普生物科技有限公司生产的HPV核酸扩增分型检测试剂盒（包括DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒及杂交试剂盒）和医用核酸分子快速杂交仪，美国ABI公司生产的ABI2720普通扩增仪和Beckman公司生产的DU800紫外分光光度仪，同时对21种HPV亚型（包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等1

6、5种高危亚型以及6、11、42、43、44、CP8304等6种低危亚型）进行检测。1.3实验方法1.3.1标本采集及保存用棉拭子轻轻擦净宫颈口分泌物，再将专用拭子插入宫颈管内，顺时针旋转4〜5周以获取足够的上皮细胞样本，取出后将其置入内有专用细胞保存液的取样管中，将宫颈刷柄折断，旋紧瓶盖，做好样品编号及登记，4工保存并于1周内检测。1.3.2PCR扩增及杂交检测①DNA提取：吸取标本保存液0.5mL,离心1min（14000r/min）后弃上清液，剩余标本用DNA试剂盒随带的提取液进行HPV-DNA提取。②PCR扩增：在ABI2720扩

7、增仪中进行PCR扩增，采用HPV通用引物，引物序列5'端带生物素标记。扩增过程：20°C10min（UNG酶作用）、95°C9min（预变性）、95°C20s（变性）、55°C30s（退火）、72°C30s（延伸），共进行40个循环后行72°C5min（再延伸）。③杂交：在医用核酸分子快速杂交仪中进行杂交，具体操作按杂交试剂盒说明书进行。1.4结果判断[4]杂交膜共设24个点，Biotin和IC设为对照点，当两点均为阳性则提示检测结果可信，两点全部或其中之一阴性均提示检测结果不可信；当对照点正常时，其他点出现蓝紫色圆点时其对应的HPV亚

8、型判定为阳性。任何一种HPV亚型阳性均判定为HPV感染，其中两种或以上HPV亚型阳性均判定为HPV复合感染，HR-HPV阳性或HR-HPV和低危型HPV（LR-HPV）同时阳性者均判定为HR-HPV感染，仅