肉羊冷冻精液关键技术的研究与应用

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1、肉羊冷冻精液关键技术的研究与应用陈月和，魏润元（内蒙古乌兰察布市家畜改良工作站，内蒙古乌兰察布010011）1　冷冻精液关键技术的研究1.1　研究筛选稀释液基础配方　　研究筛选稀释液配方是肉羊冷冻精液的关键技术之一。首先，我们收集了国内外多种稀释液配方，经过反复对比试验，筛选出了五种稀释液配方，其解冻后精子活力、顶体完整率和存活时间见表1，根据测定的指标数据分析，用葡3-3液作为冷冻精液稀释液配方，细管冷冻精液解冻后精液主要指标显著高于其他对照组。因此，把葡3-3液作为稀释液基础配方，做进一步的研究。表1　不同稀释液配方生产细管冻精解冻后主要指标比较表%配方稀释液液成份活力

2、顶体完整率存活率8012弱酸稀释液Ⅰ液乳糖11g，双蒸水100mL，取80mL，加卵黄20mL0.38242.329Ⅱ液葡萄糖3g，柠檬酸钠3g，双蒸水50mL，再加脱脂乳50mL，取88mL，加甘油12mL   0.41746.535葡3-3液Ⅰ液葡萄糖3g，柠檬酸钠3g，双蒸水100mL,消毒后,取80mL加鲜卵黄20mLⅡ液取Ⅰ液44mL,加甘油6mL  卵柠糖液Ⅰ液葡萄糖5.4g，柠檬酸钠1g，双蒸水100mL,配好后取80mL,加卵黄20mL0.40544.532Ⅱ液取Ⅰ液43mL,加甘油7mL  乳2奶液Ⅰ液葡萄糖1.5g，乳糖2g，果糖0.5g，柠檬酸钠3g双

3、蒸水100mL,消毒后取80mL加鲜卵黄20mL0.40843.235Ⅱ液取Ⅰ液47mL,加甘油3mL  葡3-3硒液Ⅰ液葡萄糖3g，柠檬酸钠3g，双蒸水100mL,消毒后,取80mL加鲜卵黄20mL0.39243.635Ⅱ液取Ⅰ液44mL,加甘油6mL，硒0.06㎎  上述各稀释液中每100mL加青霉素10万单位,链霉素10万单位维生素E3%(V/V)1.2　添加多不饱和脂肪酸的对比　　根据多不饱和脂肪酸对精子顶体具有保护作用的原理，采用葡3-3液配方为基础，添加不同浓度的富含多不饱和脂肪酸（PUFA）的深海鱼油，采用2步稀释法，将鲜精活力在0.70以上的精液稀释冷冻，解

4、冻后活力和顶体完整率统计分析见表2。表2　绵羊精液稀释液中添加不同比例多不饱和酸和脂肪酸解冻后活率和顶体完整率变化处理组处理（PUFA添加浓度）（V/V）解冻后活力解冻后顶体完整率10%0.39746.520.5%0.40548.131%0.41848.342%0.41549.353%0.41650.265%0.40247.878%0.38242.1由上表可以看出：　　A、肉羊冷冻精液稀释液中添加0.5%-5%PUFA后，精子解冻后活率显著高于对照组﹝P＜0.05），说明在绵羊精液稀释液中添加一定比例的PUFA有利于精子解冻后活力的复活，而如果添加比例超过8%时，解冻后活力

5、显著低于对照组（P＜0.05）。　　B、肉羊精液稀释液中添加1%、2%、3%、4%、5%PUFA，精子解冻后活力组间差异不显著（p﹥0.05），其中以添加1%～3%精子解冻后活力最高（P＜0.05），达0.415～0.418。　　C、肉羊冷冻精液稀释液中添加0.5%-5%PUFA后，精子解冻后顶体完整率显著高于对照组和其它试验组（P＜0.05），精子解冻后顶体完整率达47.8%～50.2%，其中以2%～3%添加组最高（P＜0.05），达49.3%～50.2%。　　D、肉羊精液冷冻稀释液中添加PUFA，在0.5%～3%范围内，随PUFA添加量增加，精子解冻后顶体完整率有增高趋

6、势。　　综合分析可知，肉羊精液稀释液中添加3%的PUFA，同时添加3%的维生素E的处理组，冷冻、解冻对精子的损害最小，解冻后各项指标均有所改善。1.3　不同冷冻温度的冷冻效果对比　　冷冻精液温度的高低影响着冷冻精液的质量，温度的变化通过调节冻结网与液氮面的距离来实现的。同一肉羊精液稀释液采用不同冷冻温度的冻精效果见表3。数据显示，冻结网与液氮面的距离在3.5～5cm，冻结温度在-90℃～-105℃时，冷冻时间为9min，生产的细管冻精解冻后精液主要指标显著高于其他对照组。表3　不同液氮面的冷冻效果对比冻结网距液氮面的距离/cm8753.52冻结温度-55-75-90-105

7、-125解冻活力0.280.330.410.450.30生存指数1.711.791.982.031.451.4　解冻温度、时间的对比实验　　细管冷冻精液的解冻是将细管冷冻精液从液氮中取出后，立即投放与水中，水的温度和在水中停留的时间同样影响精子解冻的效果。采用40℃、42℃的解冻温度，在水中停留8s、10s、12s时，冷冻精液解冻后的活力、38℃存活时间、存活指数和顶体完整率见表4。用42℃的解冻温度，在水中停留8s，细管冻精解冻后精液主要指标显著高于其他对照组。表4　不同解冻温度、时间的对比见表方法40℃8秒40