猪精液冷冻保存的研究概况

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1、近年来，为了捉高猪冷冻精液解冻后活力和受精能力，减少冷冻精液与鲜精之间的差距。国内外科研工作者进行了多方面、多途径深入系统的研究。国外报道了较多关于稀释液屮添加糖类、抗氧化物质、蛋白质等对猪冷冻精液品质彩响的研究。国内对猪精子冷冻保存的研究，主要集屮于冷冻方法和甘油作为冷冻保护剂方面的研究。周佳勃等、李青旺等和索永善等和索永善等，均对冷冻程序、冷冻方法和甘油等抗冻剂的不同添加量对猪精子冻后活力的彩响进行过详细的研究。其最终目的都是为了能建立起一套完善的猪精液冷冻体系，从而提高冷冻一解冻后猪精液的受精率。1.1猪精液冷冻程序

2、猪精液的冷冻保存主要包括降温、冷冻、解冻等过程。1.1.1降温猪精子对温度极敏感，特别是低于15紇时，精子易受低温打击或发生冷休克。长期以来一般采用调节平衡时间来控制降温速度，还可以向稀释液屮加入抗冷休克物质尽可能降低对精子的损伤。猪精子对低温打击和冷冻都非常敏感，但随着平衡时间的延长，对低温打击的抵抗能力逐渐增强，所以目前多采用在4〜6h内缓慢降温至40C〜5紇。Jhonson等报道，延长50C平衡时间能够明显捉高抗低温打击的能力。精子在从59向一59—一149降温过程中，由于抗冻保护剂的存在往往处于一种过冷状态，这个过

3、程若降温过快，急剧的温度和滲透压改变会造成精子严重损伤。现在一般认为以l°C/niin的速率缓慢降温叮使精子内水分在胞外水分结冰后冇充分的时间流出而防止冰晶形成。对抗冷休克物质的研究比较多。脱脂乳、蛋黄用的是最多最普遍，月•发现0EP(氨基一钠一十二烷硫酸酯)和B环糊精的添加更能增强蛋黄的抗冷休克保护作用，卵黄屮的卵磷脂和低密度脂蛋白等成分在精子冷冻解冻中对精子起到了保护作用。1.1.2冷冻对猪精子的损伤在精液的冷冻过程屮，当温度降低到大约一5乜时，细胞内外的水分均不会形成结品而处于过冷状态。随着精液温度的进一步降低(-1

4、0°C),细胞外的水分开始形成冰晶，而细胞内的水分也即将固化。由于冰晶的机械性刺激，对细胞I占I有结构产生一系列损害。当精液温度处于-10-5°CZ间时，冰品首先在细胞外的电解质屮形成，而细胞内的水分仍然保持过冷状态而未形成冰品。冰品的形成会造成精细胞的机械性伤害，且这种损伤是不可逆的。廿油的冷冻效果相对于其它冷冻剂较好，但甘油浓度、冷冻一解冻速率7、滲透压等Z间存在一种很微妙的相互关系，必须I■办调才可能达到最好的冷冻解冻效果。目前认为适合猪精了的最佳方案是甘油浓度2-3%,冷冻速率-30°C/min,解冻速率1200°

5、C/min,420-580Mosm/kg为最佳渗透压。1.1.3解冻能否迅速越过危险温区的解冻速度是影响精了存活的一个重要因素。解冻速度对精了顶体的影响主要由甘油浓度引起，以最优化的冷冻速度冷冻的精了在缓慢解冻或快速解冻后只有少数能够恢复活力，这表明精子在缓慢降温的过程中受到严重的损伤。选择合适的解冻液是提高精液解冻后活率的关键要素。冃前的解冻液人致分为两类：一类是含蛋口质解冻液。例如精清被认为是一种基木的解冻液，在精清中解冻精了既能提高精了存活率，又能改善精了在母畜生殖道内的运动，提高受精率。但精清对于冻融公猪精子受精率

6、的作用机理冃前仍不清楚。另一类是含盐类的解冻液。冃丽最常用的解冻液都以含盐溶液为主，包括BTS解冻液、llwlscmbcrg解冻液、OLEP解冻液等。1.1.4猪冻精的受精结杲猪精液冷冻保存最主要的FI的就是满足人工授精的需求，然而冃前人工授精后的结果并不令人满意。造成这种结果的原因主要有两方面：一方面是猪人工授精要求的剂量高达20〜30亿精了，而大多数冻精的包装类型（如0.25mlstraw、0.5mlstraw、FlatPeike等）远不能满足其要求：另一方面是冻精质量不高，冻后活率还达不到牛的水平，且输精后许多活率低

7、或运动能力差的精了在没有到达输卵管壶腹部与卵了相遇时就己死亡。为了解决这些问题，近年來国外许多专家都在致力于这方面的探索研究。例如，开发大容量的包装形式，进行了宮内输精等，以提高授精效果。1.2精液稀释液与添加剂猪精液稀释液是指为了进行有效的保存、运输和扩大猪精液的利用，向采得的精液中添加一定数量的、按特定配方配制的、适宜于精子存活并保持授精能力的化学物质。一般有以卜•几类物质：一是稀释剂，用以扩大精液容量，此类物质必须保证整个稀释液与精液具有相同或相似的渗透压；二是营养剂。精了在保存过程中不停地进行新陈代谢作用，为了补充

8、精子的能量消耗，向精液中添加最简单的能量物质，以补充消耗的能源；三是保护剂。保护精了不受各种不良环境因素的危害而添加的物质，包括缓冲物质、防冷刺激物质、抗冻物质和抑菌物质；四是其他添加剂，改善精子所处坏境的理化特性，提高授精机会。1.2.1精液冷冻保存稀释液稀释液是精子的保护剂，对精液冷冻的效果有决定性