安格斯牛除精浆冷冻精液效果的研究

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1、安格斯牛除精桨冷冻精液效果的研究硕士研究生:姬云涛指导教师:曹斌云教授(西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌，712100)摘要用安格斯牛精液为实验材料，采用两步稀释法，在稀释前分别以脱脂乳一卵柠液和生理盐水为洗涤液，以离心法去除精浆，然后计算精子活率和测定精浆中酶的活性，观察精子顶体状态并分析其超微结构，用仓鼠进行穿卵试验，以探讨除精浆对安格斯牛精子冷冻保存效果的影响，并对其发生的机理进行分析。试验共分四组:生理盐水除精浆组、脱脂乳一卵柠液除精浆组、离心不除精浆组及常规冷冻组。分别对稀释后、平衡后和解冻后三个阶段进行比较，结果表明:1.以生理盐水和

2、脱脂乳一卵柠液为离心洗涤剂除精浆的两个试验组，解冻后精子活率分别为。.493士0.043和0.497士0.067.I类顶体率分别为(78.3士2.7)%和(78.7土2.8)%，精子畸形率分别是(6.3510.72)%和(6.3210.57)%。这两组之间这几项指标差异不显著(P>0.05)，说明用生理盐水和脱脂乳一卵柠液为离心洗涤剂除精浆对精子品质无显著影响(P>0.05)。而未除精浆的另两组，离心与非离心组解冻后精子活率分别为0.312士0.053和0.313士0.062.1类顶体率分别为(58.7士2.9)%和(58.9士2.9)%，精子畸形率

3、分别是(9.42士0.38)%和(9.39士0.82)%。这两组之间这几项指标差异也不显著(P>0.05)，说明离心对牛精子品质无明显影响(P>0.05)。而除精浆的两组与未除精浆的两组之间上述指标存在显著或极显著差异(P<0.05;P<0.01),表明去除精浆对解冻后牛精液品质有显著提高。2.经过稀释、降温和平衡以及冷冻等处理过程，除精浆的两个试验组精液的精浆中GOT和LDH的活性逐渐上升，并在稀释后达到一个较高值，分别为(72.17士3.29)lU/ml和(71.98士4.05)lU/ml,(284.1士31.4)IU/ml和(281.9士45.

4、1)IU/ml。而未除精浆的两组在稀释后没有出现较高值，分别是(52.45士5.18)IU/ml和(51.83士7.01)IU/ml,(208.7123.6)IU/ml和(206.9土39.2)IU/ml。表明除精浆增强T精子膜的通透性。从平衡到解冻后，除精浆的两组GOT和LDH活性与未除精浆的两组相比较，增加的幅度明显的缓慢。在解冻后各试验组的GOT和LDH活性无显著差异。这可能是由于除精浆降低了冷冻过程中对精子膜有损伤作用成分的原因。3.电镜观察发现，离心洗涤处理使冷冻前精子质膜有轻微扩张。除精浆处理没有对冷冻前精子膜造成形态上明显影响;而冷冻后

5、，未除精浆造成了精子的严重损害，出现了类似顶体反应的退行性变化，精子顶体肿胀破裂，内容物丢失，线粒体鞘受损。除精浆精子，从整体上观察所受损伤程度明显减少。除精浆处理明显增强了精子的耐冻性。4.用去透明带仓鼠卵受精试验检测冻后精子受精能力，除精浆的两个试验组精子穿卵率可达(84.5士7.8)%和(85.1士6.2)。而未除精浆的两组精子穿卵率仅为(70.4士12.3)%和(71.1士9.7)%。前两组与后两组差异显著(P<0.05)。除精浆的两组卵内平均精子数为(2.93士0.35)个和(2.91士0.59)个，未除精浆的两组为(1.58士0.43)个

6、和(1.7010.81)个，前两组与后两组也存在明显的差异(P<0.05)，本实验结果表明除精浆可以显著提高冻后精子受精能力。关键词:离心:洗涤:精子;精浆:冷冻保存:安格斯公牛;StudiesontheEffectofAngusBovineFrozenSemenafterRemovalofSeminalPlasmaPoststudent:JiYun-TaoSupervisor:Prof.CaoBin-Yun(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedcine,NorthwestSci-TechUniversityo

7、fAgricultureandForestry,YanglingShaanxi712100)AbstractInthisstudy,semensamplescollectedfrom4angusbullwerepooledanddividedinto4aliquots.Twoofthem(treatment1andtreatment2)werewashedtwice,withskinmilk-egg-aminomethane-citric-acidand0.9%Naclrespectively,thefluidwasremovedaftercentr

8、ifugationat1000r/min5minuteseachtime.Thethirdaliquot(t