无角道赛特绵羊精液低温冷冻与保存技术的研究

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1、无角道赛特绵羊精液低温冷冻与保存技术的研究乌兰托娅#1，赖彦#1，周欢敏2*（内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特，010018内蒙古农业大学生命科学学院，呼和浩特，010018）摘要：采用不同成分的冷冻稀释液对无角道赛特种公羊鲜精进行了低温冷冻与保存的实验。结果显示：葡萄糖3.7g+Tris0.02g+柠檬酸钠3.7g+乙二醇5ml+EDTA0.3g+PS20万IU+蒸馏水100ml作为稀释液冷冻并解冻后活力效果最好，解冻后活力为40%,顶体完整率54%；低温冷冻精液在对解冻温度进行了对比试验，42℃解冻活力效果显著（P<0.01）；对稀释液比例进行试验对比，鲜精与基础液1：2

2、比例解冻精子活力极显著于1：1（P<0.01）。关键词：稀释液；精液冷冻；精液保存；精液活力；无角道赛特绵羊#同等贡献作者*通讯作者世界畜牧业的发展的主要特征是规模化和现代化，发展的趋势是绿色、安全畜产品的生产。而我国肉羊业产业化水平低，农户养羊多分散饲养，经济效益差。种羊市场发育异常，种羊价格居高不下，严重影响了肉羊繁殖生产体系的形成，阻碍肉羊的产业化生产。本实验主要对无角道赛特绵羊种羊的鲜精进行冷冻保存实验，推广羊冷配技术的突出优点可以大幅度提高优秀种公羊利用率，加速品种的育成，便于羊改良配种工作的操作；大量减少使用种公羊，并可以节省种公羊饲养管理费用。同时，对优良种蓄在短期进行后

3、裔测定，保留和恢复某一品种或个体的优良遗传特性，以及进行血统更新、引种、保种、降低生产成本等发挥重要意义。因此，开展羊冷配可以显著提高羊的品种改良并可使其商品化得到前所未有的经济效益。绵羊精液冷冻技术在20世纪50年代开始，Emmens[1](1950)将绵羊精液在-79℃保存，获得了成功并输精产羔。我国于1974年开始进行绵羊精液冷冻研究。精液冷冻是利用液氮（-196℃），干冰（-79℃）等作冷冻源，将精液经过特殊处理后，保存在超低温下，达到长期保存的目的。无角道赛特绵羊是世界著名优良肉毛兼用品种，有多种优良种质特性，如，生长发育快，肉用性好，较强的适应性和抗病性，早熟多胎，常年发情

4、等，是目前世界上生产羔羊最好的终端父系品种之一。目前，应用羊精液冷冻较先进的国家有：法国，英国和俄罗斯，受胎率可达60%以上，最高的是法国，可达75%。在我国开展羊冷冻精液制作与应用的地区主要是新疆，内蒙古，辽宁和山东，受胎率在50%—60%的水平。因此，绵羊精液冷冻稀释液的配制是非常重要的，它直接影响着精液解冻后的活力，细胞顶体完整率，受胎率等等。1材料与方法1.种羊的选择与精液采集1.1种羊的选择试验选择膘情中等，体质健康，性欲旺盛的同品种公羊。本实验采用为内蒙古赛澳牧场科技发展有限公司种公羊无角道赛特种公羊5只。1.2精液采集采用人工假阴道采精，精液采出后，立即在35℃~38℃下

5、镜检。所5采集的精液必须没有异常的气味，色泽为乳白色，精子形态正常，畸形率5%以下。采集精液活力在0.8以上方可用于冻精。器械为精液采集及冻精制作常用器械及设备。1.3药品葡萄糖，蔗糖，乳糖，柠檬酸钠，Tris，乙二醇，甘油，PS双抗，EDTA，卵黄等。以上试剂均为国产。2.精液稀释和平衡2.1第一次稀释和平衡鲜精与基础液按1:1—1:2比例等温稀释，然后用8—10层纱布包裹储精瓶，降温后，置于4℃冰箱中平衡1h。2.2第二次稀释和平衡将经过第一次稀释和平衡的精液在冰箱内按1：1的比例加入含冷冻保护剂*的等温稀释Ⅱ液后，用精液分装机分装到0.5ml细管内并封口，再放入4℃的冰箱中继续平

6、衡2-4小时。2.3细管精液冷冻将液氮倒入冷冻箱，待液面平稳后，再将细管架放入冷冻箱内使细管距液面2cm左右，冷冻5分钟之后，做好标记最后放入液氮罐内保存。3.解冻从液氮中取出细管，空气中稍停留10s，投入40℃—45℃水中解冻15—20s，进行活力鉴定和计数及顶体完整率计算.4.计算4.1精子活力鉴定呈直线前进运动的精子数精子活率=————————---------100%总精子数在显微镜下观测，呈直线运动的的精子，当活率为100%称为1.0级，活率90%为0.9级，下面以此类推。4.2精子顶体异常率的计算用吉姆萨染色法染色后，将精液染片置于显微镜下，在1000倍油镜下观察。染色后的

7、精子顶体呈紫色，包围精子头部。根据顶体完整情况分为4种：完整型、膨胀型、破损型、全脱型。顶体各异常精子数精子顶体各异常率=-------------------100%精子总数精子顶体完整率=（1-精子顶体总异常率）100%2.结果与分析2.1不同稀释液对精子冷冻保护的影响在本试验研究中，共采用了5种不同配方的稀释液（表一），对不同稀释液对精子冷冻保存后解冻活力集中对比实验。对比解冻后活力发现，从表二可以看出，E与D两组比较，用乙二醇作为冷冻保