寡糖衍生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析方法研究

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1、------------------------------------------------------------------------------------------------寡糖衍生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析方法研究第38卷2010年3月DOI：10.3724/SP.J.1096.2010.00307分析化学（FENXIHUAXUE）研究报告第3期307～312ChineseJournalofAnalyticalChemistry寡糖衍生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间

2、质谱分析方法研究韩欢欢摘要马岩王璐张万军卫军营张养军钱小红*（军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京蛋白质组研究中心，蛋白质组学国家重点实验室，北京102206）TOF）中的检测灵敏度，为提高中性寡糖在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-建立了以1-（4-4-氰基苯基）-哌啶碳酰肼（CPH）为衍生化试剂对寡糖的标记方法。寡糖的还原端与CPH的酰肼基团反TOF质谱进行分析。结果表明：在反应温度95℃，应生成腙，使得寡糖被CPH标记，衍生物以MALDI-醋酸浓度为0.125%（V/V），CPH

3、过量100倍的条件下，衍生产率可达最大，并且CPH衍生可使中性寡糖在MALDI-TOF质谱中的检测灵敏度提高10倍。本方法简便快速，灵敏度高，适合微量寡糖链的质谱分析。——————————————————————————————————————------------------------------------------------------------------------------------------------关键词（4-4-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱；1-氰基苯基）-哌啶

4、碳酰肼；中性寡糖1引言糖基化作为一种普遍的蛋白质翻译后修饰反应，在生命过程中起着重要作用。糖蛋白上的寡糖链参与胞外胞内的信号转导，并能引发与其它分子之间特异的相互能够影响蛋白的稳定性及蛋白的构象，。基质辅助激光解吸电离飞行时间（MADLI-TOF）质谱以其简单、快速和较高的灵敏度已经成［3，4］。但是，为糖结构分析中的重要手段由于寡糖的亲水性强，缺乏易于结合质子的碱性基团，离子化作用TOF质谱对寡糖链结构的分析远远落后于对蛋白/肽段的结构分析。为提高寡效率较低，使得MALDI-聚糖在质谱中的检测灵敏度

5、，研究者进行了各种尝试，主要通对寡糖的化学修饰来提高寡糖的质谱检测［5，6］［7］和吡啶），灵敏度。如在寡聚糖的还原端通过衍生化加上各种结构中含有质子的基团（如季铵碱［7］或加上易得质子的基团（如胍基）；通过增强寡聚糖的疏水性来提高其检测灵敏度，因为疏水性强的［1，2］分析物更容易与基质形成均匀的混晶从而产生更强的信号糖的还原端从而提高寡聚糖在质谱中的检测灵敏度。［8］［9，10］［11］，、如将苯肼苾酪基团标记在寡聚——————————————————————————————————————----

6、--------------------------------------------------------------------------------------------1-（4-4-氰基苯基）-哌啶碳酰肼（CPH）包含哌啶基团，该基团在含氮杂环化合物中具有较强的碱性（pKa=11.2），推测其可能会使寡聚糖易于质子化，并且其结构中的苯环能够增强寡聚糖的疏水性。目前尚未见采用含哌啶基团的试剂对寡糖进行衍生化以提高其质谱检测灵敏度的报道。本研究以麦芽七糖为样品，通过优化反应条件，建立了CP

7、H的寡糖衍生化方法，衍生化后的麦芽七糖的质谱检测灵敏度提高了10倍。此方法应用于葡聚糖和去唾液酸化胎球蛋白的N-糖链质谱分析，获得了满意的结果。22.1实验部分仪器与试剂4800ProteomicsAnalyzer基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱仪（美国ABI公司），仪器控制软件为4700SeriesExplorerSoftware，数据处理软件为DateExplorerSoftware4.5；石墨化碳黑萃取柱（美国Alltech公司）；离心机（美国Sigma公司）；冷冻干燥离心机（美国Therm

8、o公司）。1-（4-4-氰基苯基）-哌啶碳酰肼（美国Maybridge公司）；碘乙酰胺（IAA）与乙腈（比利时Acros公N-2，5-司）；麦芽七糖（DP7），去唾液酸化的胎球蛋白（Asialofetuin），肽-糖苷酶F（PNGaseF），二羟基苯5-甲酸（DHB），甲氧基水杨酸（美国Sigma公司）；葡聚糖（包含聚合度1～20的葡萄糖聚合物，美国2009-07-15收稿；2009-11-11接受2006CB910803，2007CB914104———