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1、刚果嗜皮菌论文：刚果嗜皮菌选择性分离方法的研究及盘羊分离株的分离鉴定【中文摘要】刚果嗜皮菌(DermatophilusCongolensis),属于放线菌目(Actinomycetales)嗜皮菌科(Dermatophilaceae)嗜皮菌属(Dermatophilus)的成员。可通过皮肤感染而引起多种动物以及人的一种急性或慢性皮肤性传染病,以浅表性渗出、脓包性皮疹或结节为主要临床特征。动物感染后可引起生产力以及抗病力下降,绵羊感染后可导致羊毛品质及皮革质量降低,羔羊消瘦及死亡,OIE将本病列为
2、B类疫病。由于刚果嗜皮菌在生长过程中存在孢子期和菌丝期的特性,并且在从病变皮肤中分离时常受到杂菌污染而难以获得纯培养菌,因此建立一种高效、有效的刚果嗜皮菌的分离方法一直是国内外学者关注的技术问题。本研究以分离纯化并鉴定的刚果嗜皮菌绵羊株和发病盘羊病变皮肤为试验材料,采用平板涂抹的方法,研究病料样品的不同的预处理方法、培养基、增菌活化剂、杂菌抑制剂对刚果嗜皮菌的分离效果的影响,以期建立一种用于实验室分离纯化刚果嗜皮菌的高效简便的方法,并在此基础上,对发病盘羊皮肤病料进行刚果嗜皮菌的分离,并对刚果嗜
3、皮菌盘羊分离株进行菌落与形态学鉴定、家兔人感染试验、PCR鉴定及RAPD分析。结果如下：1、皮肤病料在无菌蒸馏水室温静置浸泡15天后,取上清接种于pH7.06%酵母膏活化液中,60℃培养30min,再涂于绵羊血液琼脂平板,37℃培养48h,可获得较多的刚果嗜皮菌典型菌落。菌落经染色镜检,可观察到呈不规则状及少量的圆形孢子。而采用将病料悬液经37℃水浴1h、烛罐处理15min均未分离到目地菌；0.05%SDS及0.05%SDS6%蛋白胨的活化液对病料中的刚果嗜皮菌无活化作用。6%酵母膏的最佳活化温
4、度为60℃30min；刚果嗜皮菌在高氏Ⅰ号培养基上生长不良,在普通营养琼脂培养上不生长,在LB琼脂培养基上的生长情况不如绵羊血液琼脂；常用于放线菌分离培养中防止杂菌生长的孔雀石绿和重铬酸钾抑菌剂,在本试验中无明显抑制杂菌生长的作用,不适合作为刚果嗜皮菌分离培养的选择性抑菌剂。本试验所建立的刚果嗜皮菌分离纯化方法可为动物与人类嗜皮菌病的病原学研究提供有用的技术手段。2、采用本研究建立的刚果嗜皮菌分离方法,从发病盘羊皮肤病料中分离获得刚果嗜皮菌(盘羊株),经培养特性、菌体染色与形态特性、PCR检测、
5、分离株间接免疫酶染色鉴定,以及家兔感染试验均与绵羊分离株相同。说明来自同一地区发病的刚果嗜皮菌绵羊和盘羊分离株的某些生物学特性基本一致。3、对刚果嗜皮菌绵羊株和盘羊株的DNA进行随机引物扩增多态性DNA(RAPD)分析,扩增产物有一定的多态性,根据欧氏遗传距离公式计算出遗传距离为0.6667,显示盘羊株与绵羊株的基因组DNA有不同程度的差异。【英文摘要】DermatophiluscongolensisisamemberofActinomycetales,Dermatophilaceae,Derm
6、atophilus.Causedthediseasesofanacuteorchroniconavarietyofanimalandhumanbytheskincontanct.Withsuperficialexudativepustulerashornodulesasthemainclinicalfeatures.Theinfectionmaycauseadeclineinproductivityandresistanceofdisease,infectiononSheepcanleadtor
7、educethequalityofwoolandleather,OIEliststhediseaseinBclass.BecausethecharacteristicsofthegrowthofDermatophiluscongolensisinsporesandhyphae.Dermatophiluscongolensisisolatedfromskinlesionsisoftendifficulttoobtainpureculturebacteria.Thereforetheestablis
8、hmentofanefficientandeffectiveseparationoftheDermatophiluscongolensis.ToisolatedandidentificateofDermatophilusCongolensisofArgalisheep.Inthisstudy,purifiedandidentifiedsheepstrainsofDermatophiluscongolensisasmaterial,thedifferentpretreatmentmethodsan
