厦门地区近海温泉嗜热菌的分离、鉴定

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1、万方数据第26卷第1期2007年2月台湾海峡JOURNALOFOCEANOGRAPHYINTArⅣANSTRAITV01．26．No．1Feb．．2007厦门地区近海温泉嗜热菌的分离、鉴定杨波，陈新华(国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005)摘要：嗜热茵是一类特殊的极端环境微生物．本文所用的实验样品采集于厦门地区两个近海温泉的4个不同位点，通过16SrDNA序列分析对所分离到的312株细茵进行了归类总结，鉴定出嗜热栖热茵、嗜热脂肪泥土芽孢杆菌、嗜高温纤维分解菌、泥土芽孢杆菌属、水生栖热茵、假单胞茵属、木糖氧化无色杆菌、unculturedsheepmite

2、bacte—rium、unculturedgammaproteobacterium等9种嗜热菌株，其中嗜高温纤维分解茵和嗜热栖热茵是主要的可培养优势茵群．其生长温度均在60～85℃，中性pH值．从而得出厦门地区近海温泉样品中的微生物生长类群信息，并发现了某些可能的新茵群，有助于了解该地区近海温泉特有环境下的可培养的微生物群落类型．关键词：嗜热茵；16SrDNA序列分析；分离鉴定中图分类号：Q93-3文献标识码：A文章编号：1000-8160(2007)01-．0061·10嗜热菌是一类生活在高温环境中的微生物，属极端微生物范畴．因其细胞和酶蛋白独特的耐热性和与之相适应的分子结构，引起人们的

3、广泛兴趣，并成为人们开发利用的重要微生物资源．从各种高温自然环境及人造地热环境中，已筛选和分离出不同属种的嗜热菌【l’2J．自从美国人ThomasB于1969年首先从美国黄石国家公园分离出第一个严格意义的水生栖热菌(Therrnusaquaticus)高温菌以来，已有超过30属、80种、近400株高温菌被分离和描述¨j．通过详细的生态调查以及微生物分类学方法，在美国的国家黄石森林公园、俄罗斯的勘查加半岛、冰岛的克里苏微克以及新西兰的瓦卡里瓦里瓦毛利传统地热村等地均发现了大量的新的嗜热菌的分类种群H1．我国的温泉热泉众多，主要分布在西藏、云南、广东、四川、福建、台湾和江西等省．并且已经在热泉

4、中分离鉴定了一些嗜热酸微生物，如从云南腾冲分离得到腾冲酸热两面菌(Acidianustengcongensis)和腾冲嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobactertengcongensis)、从广东温泉分离得到嗜热细菌非解朊栖热菌(Thermusnonproteolytious)等”J．蔡秒英等(1992)、和致中等(1987)也分别分离得到嗜热菌属非解朊栖热菌新种和极端嗜热性芽孢杆菌(Bacillusstearothermpohilus)[6,7／．福建省厦门市有着丰富的地热泉群，由于其独特的地理位置，这些温泉均为近海温泉，有其自身的特有特点．温泉水中含有很高的盐度和大量的离子、微

5、量元素及矿物质，为研究近海温泉嗜热菌提供了良好的自然环境．本工作对采集于厦门地区的近海温泉样品进行分离、培养、鉴定并进行归类总结，探讨其生理生化特性，得出厦门地区近海温泉样品中的微生物生长类群，并发现某些可能的新菌群，有助于了解该地区近海温泉特有的生态环境下的微生物群落收稿日期：2006-03-22基金项目：“十五”中国大洋专项资助项目(DYl05-2-05-02)作者简介：杨波(1982～)，女，在读硕士生．通讯作者：陈新华，男，研究员；E—mail：chenxinh@tom．corn万方数据台湾海峡26卷信息，并为后续的研究提供了一个良好的筛选平台．1材料与方法1．1实验材料1．1．1

6、菌种工程菌E．coliDH50t和E．coliXL—Blue为本实验室保存．各个分离菌群采自福建省厦门地区的近海温泉．1．1．2培养基LB培养基成分为NaCllg，YeastExtract0．59，Tryptone19，琼脂1．59(固体培养基)，蒸馏水100cm3；2216E培养基成分为YeastExtract0．19，Tryptone0．59，FeP040．0019，琼脂1．59(固体培养基)，陈海水100cm3．1．1．3试剂及仪器pGEM—T购自Promega公司；pMD18一Tvector，T4DNALigase，TaqDNAPolymerase，dNTPs，核酸酶S1，CIAB

7、购自TaKaRa公司；RNase，蛋白酶K，溶菌酶为Sigma公司产品；UNIQ一10柱式DNA胶回收试剂盒购自上海生工公司；引物合成和DNA测序交由上海生工生物工程技术服务有限公司完成；其余试剂均为国产或进口试剂．PCR扩增仪(Biometra，T3)，凝胶成像系统(UVP)，H-600透射电镜．1．2实验方法1．2．1采样试验样品采自厦门地区的近海温泉——日月谷温泉和中州温泉，其中中州温泉为咸水温泉，富含硫(s)、磷