中药甲宁对自身免疫性甲状腺炎治疗作用实验探究

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1、中药甲宁对自身免疫性甲状腺炎治疗作用实验探究【摘要】目的研究中药甲宁对自身免疫性甲状腺炎治疗作用。方法用0．05%碘化钠和福氏佐剂抗原乳剂进行造模，2周后加强免疫，以后每周加强免疫1次，至第6周结束[1-3]。正常对照组不做任何处理。各药物组即①~④组免疫后第3周开始灌胃给药，1次/d，均按每100g体质量1ml容积给药，⑤、⑥组大鼠给与等容生理盐水。第10周结束实验。取血(3ml)，分离血清冻存(-80℃),测定甲状腺球蛋白抗体(TGAb)，甲状腺微粒体抗体(TPOAb)。测量的甲状腺的重量指数。甲状腺组织进行病理检查

2、。结果组织学示雷公藤组及甲宁大、中、小剂量组甲状腺病变程度均较模型组轻，差异有统计学意义(P<0．05)。模型组大鼠重量及重量指数高于正常对照组和各给药组，差异有统计学意义。但各给药组之间差异无统计学意义。模型组大鼠血清TGAb、TPOAb水平明显高于正常组(P<0．001)，而各给药组大鼠升高不明显。结论表明甲宁、雷公藤对大鼠自身免疫性甲状腺炎有治疗作用。并且甲宁大剂量组的治疗效果明显优于雷公藤组(P<0．05)，中、小剂量组差异无统计学意义。【关键词】中药甲宁;雷公藤;自身免疫;甲状腺炎1材料71．1动物SD大鼠，体

3、重180~220g，雌雄各半。河北医科大学实验动物中心提供，合格证号:DK0504-0001。1．2药品与试剂甲宁，中药汤剂，主要有三棱、莪术、柴胡、五味子、炮甲株、何首乌、夏枯草、野菊花、女贞子等煎制而成，由河北省中医药研究院提供，药液浓度每毫升含生药量2．4g，猪甲状腺球蛋白(PorcineThyroglobulin,PTg,购自SIGMA公司)；完全福氏佐剂由福源生物制造；雷公藤片由三九企业集团三九黄石制药厂生产，批号:041007，为雷公藤提取物，每片含雷公藤甲素33μg，用生理盐水研磨制成每毫升含雷公藤甲素1．

4、5μg的溶液。TG、TPO抗体放射免疫试剂盒由北京福瑞生物工程公司提供，批号:20051001。1．3仪器γ放射免疫计数器，西安262厂生产，型号:FJ-2008P。1．4完全福氏佐剂及不完全福氏佐剂抗原乳剂的制备将PTg用生理盐水配制成0．1%浓度的溶液，再将其与佐剂按�1∶1�(V/V)混匀，研制成油包水乳剂。每毫升乳剂中含0．5mgPTg。2方法2．1实验分组①甲宁大剂量组(24g/kg);②甲宁中剂量组(12g/kg);③甲宁小剂量组(6g/kg);④雷公藤组(15μg/kg);⑤模型组;⑥正常对照组，每组10只

5、。72．2造模与给药①~⑤组大鼠每天予以饮用0．05%碘化钠，实验第15天后，于背部多点皮下注射完全福氏佐剂抗原乳剂0．2ml(含PTg100μg)进行初次免疫，2周后以不完全福氏佐剂抗原乳剂0．2ml加强免疫，以后每周加强免疫1次，至第6周结束[1-3]。正常对照组不做任何处理。各药物组即①~④组免疫后第3周开始灌胃给药，1次/d，均按每100g体质量1ml容积给药，⑤、⑥组大鼠给予等容生理盐水。第10周结束实验。摘眼球取血(3ml)，分离血清冻存(-80℃),处死动物，取双侧甲状腺组织，称重并计算每100g大鼠体质量

6、的甲状腺毫克数作为甲状腺的重量指数。之后，留取一侧甲状腺组织用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色。2．3甲状腺组织病理检查7HE染色的甲状腺组织切片，光学纤维镜下分别观察甲状腺实质及间质，包括滤泡大小、上皮形态、上皮及滤泡间淋巴细胞浸润程度。并参考Charveire的分类法[3]，将上皮细胞的淋巴细胞浸润分为以下几个等级:0级，0个炎细胞/张切片，记为0分；0级，0个炎细胞/张切片，记为1分；2级，1个炎细胞/10HPF(高倍视野)，记为2分；3级，1个炎细胞/5HPF(高倍视野)，记为3分；4级，1个炎细胞

7、/2HPF(高倍视野)，记为1分；间质的淋巴细胞浸润程度(-)为0级，记为0分，(+)为1级，记为1分，(+)为2级，记为2分，(++)为3级，记为3分，(+++)为4级，记为4分，甲状腺淋巴细胞浸润程度=滤泡上皮间淋巴细胞浸润程度+滤泡上皮间淋巴细胞浸润程度。2．4甲状腺球蛋白抗体(TGAb)，甲状腺微粒体抗体(TPOAb)的测定大鼠血清TG、TPO抗体采用放射免疫试剂盒，并按试剂盒检测步骤进行TGAb、TPOAb水平测定。TGAb、TPOAb水平以抗体结合率表示。2．5统计方法计量资料采用均值±标准差(x±s)表示，

8、各组之间采用单因素方差分析，统计软件为STATA6．0,计数资料的多组间比较采用秩和检验(Kruskal-Wallis法)，检验水准α=0．05。3结果3．1甲状腺组织形态及病理检查结果正常大鼠甲状腺肉眼�7为淡红色，细条状，质地柔软，不易见到峡部；光学纤维镜下甲状腺滤泡呈圆形或椭圆形，大小均匀一致，上皮细胞呈低柱状