锌和维生素e对ⅰ型糖尿病大鼠心肌凋亡促进因子smac表达的作用论文

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1、锌和维生素E对Ⅰ型糖尿病大鼠心肌凋亡促进因子Smac表达的作用论文【摘要】目的：探讨锌和维生素E对Ⅰ型糖尿病大鼠心肌凋亡促进因子Smac表达的作用及对糖尿病大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法：按体重将大鼠随机分为正常对照组(10只)和实验组(40只),实验组动物采用腹腔注射链脲左菌素(streptozotocin，STZ)，60mg/kg一次注射，制备糖尿病大鼠模型。将40只实验组大鼠按血糖值参考体重分为4组:糖尿病对照组,糖尿病补锌组,糖尿病补VE组,糖尿病补Zn+VE组。6周后将各组大鼠处死,切取心室肌组织,进行免疫组织化学染色,观察各组心肌组织Smac

2、的表达水平,利用HPIAS2000图像分析系统测定Smac在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：正常对照组心肌细胞内Smac呈阴性表达,糖尿病对照组心肌细胞内Smac呈阳性表达;糖尿病补锌组和糖尿病补VE组心肌细胞内Smac呈弱阳性表达;糖尿病补Zn+VE组心肌细胞内Smac呈阴性表达。图像分析结果显示：糖尿病补Zn+VE组与糖尿病对照组、糖尿病补锌组及糖尿病补VE组之间Smac的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P0.05);糖尿病补Zn+VE组与正常组之间Smac的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P005)。结论：Zn

3、和VE联合使用可减低糖尿病导致大鼠心肌细胞凋亡的作用。【关键词】锌;维生素E;糖尿病;心肌;Smac;统计分析糖尿病是一种常见的具有遗传倾向的葡萄糖代谢和内分泌障碍,是由于绝对性或相对性胰岛素分泌不足引起的。近半个世纪来,糖尿病患病率和死亡率有明显上升趋势,在我国已成为继心血管疾病、肿瘤之后列第3位的常见病、多发病和慢性非传染性疾病1。糖尿病在病理组织形态上主要是由于胰岛损伤,.freelac是王晓东等2000年在线粒体中发现的一种蛋白,可释放到胞浆中促进凋亡的发生细胞凋亡和增殖的平衡是生物个体正常生长发育的基础,细胞增殖过度和(或)细胞凋亡受阻是肿瘤形成

4、过程中的重要机制。Smac是近期发现的一种促凋亡蛋白,在凋亡信号刺激下与细胞色素C(cytc)一同从线粒体中释放,可通过结合并活化apaf1以及结合并解除凋亡抑制蛋白(IAPs)对caspase3、7、9的抑制作用而发挥作用4～6。Zn作为机体必需的微量营养元素,是体内200多种蛋白酶的金属配基,其含量的增加势必有利于这些酶活性的提高。Zn对细胞保护作用的途径之一,是基于控制过氧化作用。VE作为天然抗氧化成分,对维持体内自由基平衡,促进机体正常发育,保护细胞膜稳定具有重要作用7。锌和维生素E是抗氧化剂并具有细胞保护作用。本研究应用免疫组织化学方法观察了

5、锌和维生素E联合应用对高血糖引起的心肌细胞凋亡的保护作用，旨在探讨两者对糖尿病大鼠心肌的保护作用。1材料与方法1材料昆明种SD大鼠50只,雄性,体重180～200g,武汉大学医学院实验动物中心提供,适应饲养1g/kg的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/L、pH4.4的枸橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液),正常对照组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。一周后,采尾静脉血测血糖,以血糖浓度16.6mmol/L,饮水量40ml/d,尿糖强阳性(+++～++++)的大鼠作为糖尿病大鼠。将选取糖

6、尿病大鼠40只按血糖值参考体重分为4组:糖尿病对照组,糖尿病补锌组,糖尿病补VE组,糖尿病补Zn+VE组。各组动物均喂饲人工合成饲料,配方:酪蛋白20%,玉米淀粉65%,植物油8%,纤维素1%,混合维生素1%,混合无机盐5%。混合维生素和无机盐配方参见文献5,合成饲料控制锌浓度为20mg/kg。正常对照组和实验组给予去离子水;补Zn组给予Zn浓度为20mg/L的含ZnSO4·7H2O去离子水;补VE组每天以50mg/kgVE灌胃;Zn和VE联合补充组在给予Zn浓度为20mg/L的含ZnSO4·7H2O去离子水的同时以50mg/kgVE灌胃。实验期间,密切观

7、察动物进食和饮水量变化,每周称两次体重,6周后将各组大鼠处死,切取心室壁肌组织,进行免疫组织化学实验观察。1.2.2主要试剂①即用型兔抗鼠Smac单克隆抗体(北京中杉生物技术有限公司);②超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(福州迈新公司);③DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。1.2.3免疫组织化学SP法检测Smac相关抗原主要步骤：①组织切片5μm，常规脱蜡至水，蒸馏水洗;②3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性.freelin;③切片采用微波抗原修复(3档，10min)，PBS洗4×5min;④正常羊血

8、清37℃孵育10min以减少非特异性反应;⑤一抗37℃孵育1h，P