糖心康对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡促进与抑制因子基因表达的调控作用

《糖心康对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡促进与抑制因子基因表达的调控作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、糖心康对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡促进与抑制因子基因表达的调控作用作者：姜德友柳成刚朴永植【摘要】目的探讨糖心康对糖尿病心肌损伤的保护作用及机理。方法采用STZ加高脂饮食造模。治疗组以中药糖心康灌胃，空白组及模型组以生理盐水灌胃，以基因芯片技术TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果模型组细胞凋亡较正常组发生率明显增加，两组比较差异非常显著（P<0.01），而糖心康组心肌凋亡率则下降，模型组大鼠Fas基因蛋白表达增强，与正常组比较差异非常显著（P<0.01），而糖心康组Fas基因表达减弱，与模型组比较差异显著（P<0.01），模型组Bcl-2表达减弱，而糖心康组Bcl2

2、表达较模型组增强，二者比较差异显著（P<0.01）。利用基因芯片技术在心肌基因表达谱中筛选出与细胞凋亡有关的促进与抑制因子基因主要有2个，即AF041376，M75720。结论糖心康有抑制心肌细胞凋亡作用，可使Fas基因、AF041376基因表达下调，使Bcl-2，M75720表达上调。这也是中药复方糖心康具有心肌损伤保护作用的机制之一。【关键词】糖心康糖尿病Fas基因Bcl2基因AF041376基因M75720基因　　Abstract：ObjectiveTodiscussthemechanismandprotectiveeffectofTang-Xinkangagain

3、stmyocardialdamageofdiabeticmellitusrats.MethodsThemyocardialdamagemodelsofdiabeticmellitusratsentgroupratsinisteredTangxinkangodelgroupethodandgenechiptechnologyinemyocardialapoptosis.ResultsTheoccurrencerateofapoptoticcellincreasedmoreinthemodelgroupthanthecontrolgroup(P<0.01）,apoptoticc

4、ellentgroup,odelgroup.Thedifferenceentgroup,thedifferenceodelgroup(P<0.01）.TheexpressionofBcl-2odelgroup,entgroup,thedifference(P<0.01）.Throughadoptinggenechiptechnology,ainlypromotiveandinhibitorygenesrelatedtoapoptosisintheGeneexpressionprofiling,thoseyocardialapoptosis,doechanismsoft

5、heChinesepound.　　Keyellitus；Fasgene；Bcl-2gene；AF041376gene；M75720gene　　细胞凋亡是近年分子生物学领域研究的热点之一，动物实验证实细胞凋亡在糖尿病心肌损伤病理演变过程中占重要地位，甚至在糖尿病心肌纤维化方面扮演重要角色。因此干预心肌细胞凋亡发生、调控与心肌细胞相关因子基因表达在糖尿病心肌损伤防治研究中具有重要意义。　　1材料与方法　　1.1主要试剂和药品链脲佐菌素（STZ）为美国Sigma公司产品，糖心康为黑龙江中医药大学附属第一医院药厂制作。Bcl-2、Fas试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司，原位末端标记检测

6、试剂盒购自德国ROCHE-BM公司。有关芯片试剂及仪器设备，均为上海博星基因芯片公司备制。　　1.2动物造模及分组g/kgSTZ左下腹腔注射，造模成功后，随机分为模型组和治疗组。各组均喂以高热量饲料。　　1.3给药方法治疗组以中药糖心康灌胃，空白组及模型组以生理盐水灌胃。　　1.4标本采集快速用180℃，12h处理过的手术剪刀摘取心脏，立即用预冷的生理盐水冲洗，冲洗后在冰上操作，沿心室长轴切取心肌，部分置于2.5%戊二醛及4%多聚甲醛固定，供光、电镜观察使用，部分置于液氮中冻存，以备提取RNA使用。　　1.5细胞凋亡检测⑴TUNEL法检测心肌细胞凋亡。具体步骤按试剂盒使用说明操作

7、。阳性制定标准：以细胞核被染成棕褐色为阳性结果。⑵电镜超微形态学检测心肌凋亡，其特征是：细胞核染色质密度高并边集，核固缩畸变，核膜内陷，可见凋亡小体。⑶免疫组化法检测Bcl-2，Fas基因蛋白表达。具体方法按试剂盒说明操作。阳性判定标准：大部分胞浆弥漫性染成棕褐色为强阳性表达(+++)；部分胞浆染成淡棕黄色，部分胞浆不着色为弱阳性表达(+)，介于两者之间的为阳性表达（++）。　　1.6基因芯片检测⑴总RNA提取：一步抽提法。⑵探针标记与杂交。⑶筛选标准说明：根据总数为n的有效基因