溪黄草多酚的提取、纯化、鉴定与生物活性概述

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1、溪黄草多酚的提取、纯化、鉴定与生物活性概述第一章绪论1.1溪黄草的研究进展溪黄草主根呈圆柱状，根上稀分枝或者不分枝，有很多纤维状根。其茎直立，茎上有条纹，全株布满白色的长毛和密腺毛。其叶密集，分上、中、下三部分，其中，中部叶和上部叶呈卵形或卵状长圆形，无柄，基部狭窄，然而下部叶则有柄，花期常枯萎。其头状花序呈圆锥状，狭窄而且短，在茎和枝端排列而成。头状花序包含半球状钟形的总苞，中央包含的两性花多达40个，并有一层污白色、糙毛状的在基部连合成环的冠毛。溪黄草属于长日照植物，对环境的适应性极强，只要有充足阳光和疏松土壤，排水良好，都能生长于海拔1500米以

2、下的地区，常野生于溪边湿地、沟边、村边、田边及林下，是一年生草本，在夏、秋时节采收。近几十年来，溪黄草作为一味中草药逐渐被人们认识，主要含酚类、黄酮类、萜类、氨基酸等多种化学成分，具有清热、退黄、利胆、抗菌、保护肝脏、消炎及抗肿瘤等药理作用[4]。多酚为溪黄草的主要活性成分之一，它具有较强的抗氧化性，研究表明其抗氧化性能减缓癌症、冠状动脉硬化以及和年龄相关的退行性脑疾病，另外还具有抗炎、抗菌和舒张血管的作用[5]。因此，对溪黄草多酚的含量及其生物活性进行分析与研究，有利于对其进行进一步的开发和利用[4]。1.2多酚类物质的研究进展目前常用于提取多酚物质

3、的方法一般有溶剂提取法、超声波辅助提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、微波提取法、热水提取法和超临界CO2提取法。目前，最常用的多酚浸提方法是有机溶剂提取法，常用的溶剂有乙醇、丙酮、甲醇、乙酸乙酯等[6-8]，这些有机溶剂对多酚都有着良好的溶解能力，且它们不与多酚物质发生化学反应、浸出杂质少、易于分离。它主要是根据多酚易溶于乙醇和乙酸乙酯等，不溶于苯、氯仿等有机溶剂的特性，利用多酚和溪黄草中其他组分的溶解度在不同溶剂中的差异进行分离[9]。董怡等[10]考察了蒸馏水，甲醇，60%乙醇，无水乙醇，乙酸乙酯，丁醇和氯仿对溪黄草根中可溶出组分的提取效果，7种不同

4、溶剂提取率按总酚高低排列为：60%乙醇提取物＞丁醇提取物＞甲醇提取物＞无水乙醇提取物＞乙酸乙酯提取物＞水提取物＞氯仿提取物。温玲蓉等[11]对比了不同溶剂在减压提取法与常压回流提取法下得到的溪黄草提取物的总酚含量，提取物总酚含量的高低为：60%乙醇提取物＞丁醇提取物＞乙酸乙酯提取物＞水提取物。可见，对于提取溪黄草的多酚，乙醇是备受亲睐的提取溶剂。第二章溪黄草多酚的超声提取2.1材料与设备溪黄草，广州万怡药房五山店。DPPH(2,2-Diphenyl-l-picrylhydrazyl)、福林酚试剂(Folin-Ciocalteu)，美国Sigma公司；没

5、食子酸、无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、无水碳酸钠均为分析纯。DFY-300型300克摇摆式高速中药粉碎机，温岭市林大机械有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵，巩义市予华仪器有限公司；RE-52旋转蒸发器，上海亚荣系列化仪器厂；TGL-16B台式离心机，上海安亭科学仪器厂；LSHZ-300型低温水浴培养箱，常州诺基仪器有限公司；KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；Spectrumlab752S紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司。超声在20世纪50年代被应用于提取过程，以提高提取率[32]，也被广泛应用于食品工业中的乳化、结晶

6、化和冷冻等过程[33]。研究表明，超声波在溶剂中的传播产生了一种空穴现象，空化气泡不断产生并被压缩，使得溶剂更容易渗透进入植物原材料中并通过破碎细胞壁作用促进释放细胞内物质[34]，从而显著减少提取时间、增加提取率，促进植物原材料活性成分的提取效率[35-38]。2.2实验方法10g溪黄草→粉碎→乙醇溶液超声提取→滤纸过滤→0.45μm滤膜抽滤→旋转蒸发除乙醇→加水补充溶液至50mL→加入50mL乙酸乙酯→室温振荡过夜→弃去水层→旋转蒸发至干&ra

7、rr;50%甲醇溶解定容至50mL→稀释后测定通过研究乙醇体积分数、料液比、提取温度、超声功率、提取时间对溪黄草多酚提取率的影响等单因素实验确定较优单因素条件后，设计4因素3水平正交实验[40]，见表2-1，优化溪黄草多酚提取的工艺条件。选取乙醇体积分数、超声温度、超声功率、提取时间四个因素，设计9组不同组合实验，从中筛选出最佳提取条件。根据Folin-Ciocalteu法[41]对提取液的总酚含量进行测定。标准曲线的绘制：称取0.01g没食子酸于10mL容量瓶，用50%甲醇定容到刻度。分别取60μL、120μL、180μL

8、、240μL、300μL、360μL于6个10mL容量瓶，以50%甲醇定容到