组织工程骨神经化构建的组织学研究

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1、组织工程骨神经化构建的组织学研究：刘勇，裴国献　江汕，姚旺祥，任高宏，孙新君【摘要】[目的]通过观察不同神经束植入组织工程骨后组织学的变化，探讨组织工程骨神经化构建的效果。[方法]将新西兰大白兔的骨髓基质干细胞(bonemarroalcells，BMSCs)进行诱导分化为成骨细胞，与β磷酸三钙(βtricalciumphosphate，βTCP)复合制作组织工程骨，分别将不同类型神经束植入组织工程骨，进行以下分组：A组，组织工程骨组;B组，感觉神经束植入组;C组，运动神经束植入组;D组，血管束(含有自主神经)植入

2、组;E组，感觉、运动神经束联合植入组。分别用于修复兔股骨1.5cm大段骨缺损;各组分别在12周进行组织学的Masson染色，降钙素基因相关肽(calcitoningenerelatedpeptide,CGRP)的免疫组织化学检测，并进行统计学分析，以比较骨缺损修复情况。[结果]在观察期内，有感觉神经植入的组别和血管束植入的组别在组织学上具有明显骨化作用，而运动神经束植入却没有明显的促进作用。[结论]感觉神经束和血管束具有明显的促组织工程骨成骨作用，可以作为组织工程骨神经化构建的一种方法。【关键词】组织工程骨;神经化;

3、骨缺损　　Abstract：[Objective]Tostudytheossificationeffectbyhistologyresearchontissueengineeredbonebytransplantingnervalbundlesofdifferenttypes.[Method]TheNearroalcells，BMSCs)phosphate，βTCP)tomaketissueengineeredbones,anddifferentkindsofnervalbundlesotornervalbundle

4、s.GroupD,tissueengineeredbonestransplantedicnervescontained).GroupE,tissueengineeredbonestransplantationotornervalbundles.Then,1.5cmbonedefectinfemurofNeenobservation,histologystudiesandimmunohistochemistryotornervalbundlesdidnot.[Conclusion]Sensorynervalbundles

5、andvascularbundlescaneffectivelyacceleratetheossificationoftissueengineeredbones.Theycanbeusedasaconstructionmethodfornervalizationaftertissueengineeredbone.　　Keym，长15mm，中间有侧槽,由法国贝奥路公司提供)，四孔普通钢板(长6.5cm，螺钉3.5mmф)，电钻，线锯，手术包，胎牛血清(Hyclone)，DMEM培养基、胰蛋白酶、抗坏血酸、地塞米松、β-甘

6、油磷酸钠均购自Sigma公司，多克隆羊抗兔CGRP抗体、及过氧化物酶标记的兔抗羊IgG均购自Chemican公司，SABC试剂盒购自武汉博士德公司。　　1.2实验方法　　1.2.1实验动物分组随机分为5组，每组6只动物。A组：组织工程骨组;B组：感觉神经束植入组;C组：运动神经束植入组;D组：血管束(含有自主神经)植入组;E组：感觉、运动神经束联合植入组。　　1.2.2组织工程骨的制备方法成年新西兰大白兔30只(在培养过程中因各种原因死亡的动物如数补足)，采用速眠新、氯胺酮和阿托品复合液肌肉注射麻醉。细胞的获取、培养、

7、诱导及与βTCP材料的复合参考文献[1],制作组织工程骨备用。　　1.2.3兔股骨15mm骨缺损模型的制备方法先前的研究显示兔股骨15mm缺损自身不能修复，是理想的负重骨缺损的动物模型[2]。于兔右侧后肢股骨前外侧做一纵形切口，长约8cm,切开皮肤、皮下组织和深筋膜，沿股直肌与股内侧肌间隙锐性分开，显露股骨。不切开骨膜,于股骨前外侧放置已塑形(钢板预弯一定的弧度，约5°～8°，以使钢板和股骨向前外凸的弧度相吻合)好的4孔普通钢板，电钻钻孔后依次旋入4枚螺钉固定，并在两边两个螺钉之间各加用一根细钢丝环扎固定。于钢板第2

8、、3孔之间，以线锯锯断股骨一侧，用直尺测量股骨1.5cm长,并标记好另一端截骨线，线锯锯断，并切除该段对应的骨膜，造成1.5cm段骨缺损与骨膜缺损。于骨缺损处嵌入复合细胞的βTCP，并用丝线与钢板固定。然后分别进行以下操作制作5组实验动物模型：A组，在股骨内侧切口，直到股骨处，以增加对照的同一性。B组，在股骨内侧切口，寻找并将感