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1、贯叶金丝桃总黄酮提取工艺研究论文.freelizetheextractionprocessoftotalflavonoidsinHypericumperforatumL..MethodsTheconcentrationandvolumeofalcohol,extractiontimeandfrequencyaticallystudiedbythetotalflavonoidsasthemarker.ResultsThemoreeffectiveesamountof70%alcoholunderrefluxfor3timesan
2、d2hforeachtime.ConclusionThismethodobtainsmoreeffectiveponents.Itisstableandreliable.KeyperforatumL.；totalflavonoids；hyperoside；extractionprocess贯叶金丝桃为2005年版《中华人民共和国药典》(一部)新增的药材品种,是藤黄科金丝桃属植物贯叶金丝桃HypericumperforatumL.的干燥地上部分,具有舒肝解郁、清热利湿、消肿止痛等功效,用于情志不畅、气滞郁闷、关节肿痛、小便不利等
3、。有研究表明,贯叶金丝桃总黄酮具有保肝、抗乙肝病毒和利胆作用,且其中的金丝桃苷效果最好。我们在以往研究的基础上,.freelperforatumL.购自亳州九方药材公司,产地为四川古蔺地区,安徽中医学院药学院中药教研室潘鲁敏副教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物贯叶金丝桃的上枝叶。金丝桃苷对照品购于中国药品生物制品检定所(批号111521-200303)。乙醇购自合肥酒精厂,其他试剂均为分析纯,重蒸馏水自制。2含量测定2.1金丝桃苷含量测定采用高效液相色谱法测定金丝桃苷的含量，计算金丝桃苷提取率。2.1.1对照品溶液的制备精密称取干燥
4、至恒重的金丝桃苷对照品5.2mg,置25mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,制成0.208mg/mL金丝桃苷对照品溶液。2.1.2供试品溶液的制备取贯叶金丝桃提取物约40mg,精密称定,加甲醇溶解后滤过,定容至50mL量瓶中,制成供试品溶液。2.1.3标准曲线的绘制精密吸取金丝桃苷对照品溶液0.5、1、2、3、4mL,分别用甲醇定容至10mL,制得系列对照品溶液。分别进样20μL,记录峰面积值Y,以C为横坐标,Y为纵坐标,得回归方程：Y＝175233C＋9464.6,r＝0.9999,说明金丝桃苷在10.4～83.2μg/mL
5、范围内具有良好的线性关系。2.1.4精密度试验取同一份对照品溶液,浓度为20.8μg/mL,进样20μL,重复6次,测定峰面积,结果RSD＝1.47%,说明精密度良好。2.1.5重复性试验取同一批贯叶金丝桃药材提取物6份,制备样品溶液,分别进样20μL,测得峰面积RSD＝1.36%,表明该法重复性较好。2.1.6稳定性试验取供试品溶液,分别在0、2、4、6、8h进样20μL,测定峰面积,RSD＝1.24%,结果表明在8h内样品溶液稳定性较好。2.1.7加样回收率试验精密称取已知金丝桃苷含量的贯叶金丝桃提取物40mg,精密加入金
6、丝桃苷对照品(0.235mg/mL)5mL,依法制备供试品溶液。分别进样20μL测定峰面积,计算回收率,结果见表1。表1金丝桃苷加样回收率试验结果（略）2.1.8样品含量测定按供试品溶液制备方法制备样品溶液,精密吸取20μL,注入高效液相色谱仪,测定金丝桃苷含量,见图1,计算金丝桃苷的提取率。2.2总黄酮含量测定采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定贯叶金丝桃总黄酮含量,计算总黄酮提取率。2.2.1测定波长的选择取金丝桃苷对照品、供试品溶液,比色后,进行紫外光谱扫描,其在510nm附近有最大吸收峰,因此,选择51
7、0nm作为检测波长。2.2.2测定方法精密吸取甲醇、芦丁对照品溶液和供试品溶液1.0mL,分别置于25mL量瓶中,各加蒸馏水5mL,摇匀；加5%NaNO2溶液1.0mL,摇匀,放置6min；加10%Al(NO3)3溶液1.0mL,摇匀,放置6min；加4%NaOH溶液10mL,摇匀,用甲醇定容至25mL,放置15min,在510nm波长处测定吸收度,计算贯叶金丝桃总黄酮的含量。2.2.3供试品溶液的制备称取贯叶金丝桃粉末2.0g,准确加入甲醇50.0mL,超声40min,过滤,蒸干,即得供试品溶液。2.2.4稳定性试验取样品溶
8、液,分别在0、1、2、3、4h取样1.0mL,计算样品中贯叶金丝桃总黄酮含量,结果样品在4h内稳定,RSD＝1.88%。2.2.5重复性试验取贯叶金丝桃粉末2.0g(共6份),按供试品制备方法及测定方法分别制备和测定,计算贯叶金丝桃总黄酮含量,结果RSD＝1.96%。2.2.
