乌腺金丝桃中总黄酮超声法提取工艺研究

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1、乌腺金丝桃中总黄酮超声法提取工艺研究　　摘要：本试验以总黄酮的提取率为评价指标，通过正交试验法筛选乌腺金丝桃总黄酮超声提取最佳工艺。结果表明：超声提取总黄酮的影响因素顺序为乙醇浓度>温度>超声功率>提取时间>料液比，最佳工艺条件是用样品22倍量的体积分数为60%乙醇，采用超声功率120W在超声温度60℃条件下提取50分钟，在此条件下总黄酮提取率是8.15%。　　关键词：乌腺金丝桃;总黄酮;超声提取;正交设计　　基金项目：吉林农业科技学院大学生创新项目（2015008）　　中图分类号：S567文献标识码：ADOI编号：10.14025/j.cnki.jlny.2016

2、.24.043　　乌腺金丝桃是藤黄科草本植物，功效为镇痛、止血、通乳，主要应用于吐血、子宫出血、风湿关节痛、神经痛、跌打损伤、乳腺炎[1]。研究表明，其具有治疗心脏病、抗肿瘤等作用，主要药效物质为黄酮类化合物[2，3]。黄酮类化合物因其具有抗菌、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、镇痛、保肝、利尿、调节血管渗透性、延缓衰老、防护紫外线损伤等广谱的药理作用引人瞩目[4]。鉴于乌腺金丝桃总黄酮提取工艺的研究少见报道[5]，且用超声法从乌腺金丝桃中提取总黄酮的研究未见文献报道，笔者在本试验中采用正交试验设计，对影响其提取率的多个因素进行了考察，以期优选出超声法提取乌腺金丝总黄酮的最佳工艺。　　1材料5　　1

3、.1试剂与材料　　本试验材料为乌腺金丝桃叶，于2015年9月采自吉林农业科技学院左家校区乌腺金丝桃试验田，鼓风烘干（50℃）备用。金丝桃苷标准品;无水乙醇、甲醇、亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠。　　1.2仪器　　电热鼓风干燥箱、电子分析天平、循环水式真空泵、旋转蒸发仪、超声波清洗器、紫外可见分光光度计。　　2方法　　2.1试验流程　　样品称重超声提取抽滤滤液浓缩定容离心测定含量计算提取率。　　2.2标准品溶液的配制　　精密称取金丝桃苷标准品3.8毫克，溶解于甲醇中，制成浓度为380微克/毫升的标准品母液。　　2.3空白溶液的配制　　取甲醇0.5毫升，加入5%NaNO2溶液0.3毫升，摇匀，放置

4、6分钟，加入10%Al（NO3）3溶液0.3毫升，摇匀，放置6分钟，再加入4%NaOH溶液3毫升，摇匀，放置15分钟，即为空白对照液[3]。　　2.4测定波长的选择　　对2份样品和金丝桃苷对照品经显色后，在350～700nm范围内扫描。金丝桃苷对照品的λmax=530nm处，样品提取液的λmax=525～527nm，故选择显色后在527nm处测定吸光度。　　2.5标准曲线的绘制5　　取母液稀释得系列浓度标准品溶液。分别取各浓度标准品溶液0.5毫升，按2.3项操作，离心，在527nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，金丝桃苷浓度为横坐标做标准曲线，得线性方程y=0.0006x+0.00765（

5、R2=0.99905），线性范围是5.93～380微克/毫升。　　2.6样品溶液的制备和总黄酮提取率的计算　　取药材粗粉2.0克，精密称取，用乙醇溶液超声提取。提取液抽滤浓缩，用甲醇定容并依据试验情况适当稀释，精密量取溶液0.5毫升，按按2.5项操作，测定吸光度（A），计算总黄酮的含量及总黄酮的提取率，提取率=样品中总黄酮的量/药材重量×100%。　　2.7单因素考察　　平行条件分别考察乙醇浓度、温度、提取时间、料液比、超声功率在不同水平下对乌腺金丝桃中总黄酮提取效果的影响。　　2.8正交试验　　采用L9（34）正交试验安排表进行试验，以考察多因素对提取过程的交互影响，从而筛选出超声提取最

6、佳工艺。因素及水平设置见表1。　　3结果与分析　　表1超声提取法的L9（34）正交因素水平表　　表2单因素考察结果　　3.1单因素考察结果　　单因素考察结果见表2，结果表明，乙醇浓度、温度、提取时间、超声功率对总黄酮提取效果有影响，料液比对提取效果影响不大，确定提取时料液比为1∶22。依据结果确定正交试验各因素的合理水平。5　　3.2正交试验结果　　表3超声法提取的正交试验结果　　极差分析结果的R值大小表明，四种因素对乌腺金丝桃中总黄酮提取影响程度A>B>D>C，即乙醇浓度>温度>超声功率>提取时间，说明因素A为影响乌腺金丝桃中总黄酮提取率的主要因素;四

7、种因素的K值表明各因素水平的影响程度是A1>A2>A3，B2>B3>B1，C3>C1>C2，D2>D3>D1，综上所述，理论最佳的工艺条件是A1B2C3D2，即样品用60%乙醇采用超声功率为120W在超声温度60℃条件下提取50分钟，见表3。　　3.3验证性试验结果　　按照上述确定的最佳条件，取5份样品做了5次平行试验，总黄酮平均提取率8.15%，算得相对标准偏差RSD=2