超声法提取桑黄总黄酮的工艺研究

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时间:2019-05-11

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1、超声法提取桑黄总黄酮的工艺研究作者:夏国华,戈延茹,傅海珍,戚雪勇【摘要】目的:研究超声法提取桑黄中总黄酮的最佳工艺。方法:设计正交试验,采用超声辅助提取,对桑黄中总黄酮的提取工艺进行研究。结果:以总黄酮提取率为指标,得出超声法提取桑黄总黄酮的最佳工艺为乙醇浓度70%,提取温度45℃,料液比1∶30,提取时间45min。结论:该工艺提取桑黄中总黄酮,方法简单,耗时短,提取率高。【关键词】桑黄;总黄酮;超声提取;正交设计  [Abstract]Objective:ThebestextractiontechniqueoftotalflavonoidsfromPhellinusVanin

2、iiwithultrasonicassistedtechniquewasexplored.Methods:Theorthogonaldesignwasusedintheresearchontheultrasonicassistedtechniqueextractiontechnique.Results:Theoptimumconditionsoftheextractionwereasfollows:ethanol70%;extractingtemp45℃;theratioofsolidtoliquid1∶30;extractingtime45min.Conclusion:Thi

3、sprocesswasfeaturedbyhigherextractionrateandshorterextractiontime.8  [Keywords]PhellinusVaninii;totalflavonoids;ultrasonic;orthogonaldesign  桑黄属担子菌亚门、多孔菌科,又称桑臣、桑耳、胡孙眼、孔菌等,是一种珍贵的药用真菌,在我国传统中药中用于治疗痢疾、盗汗、血崩等[1]。目前主要应用于肝炎及癌症的治疗,其特有的抗肿瘤活性及低毒性使其成为研究热点[2,3]。桑黄主要化学成分为多糖和黄酮。现有的关于桑黄的文献报道中,提取桑黄总黄酮多采用乙醇浸提或

4、回流提取,试验耗费时间长,且提取率不理想[4]。  本研究采用超声辅助提取,并对提取条件进行优化。  1仪器与试剂  1.1仪器  KQ250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);RotavaporR200旋转蒸发仪(德国Buchi公司);FD1C50冷冻干燥机(北京博医康技术公司);UV2401型紫外分光光度仪(日本岛津公司)。  1.2试剂8  芦丁标准品(南京泽朗,经高效液相色谱法检测纯度大于99%);桑黄子实体(PhellinusVaninii,长白山区杨树野生桑黄,购自延吉长白山特产经营部,本院张朝辉教授鉴定);水为实验室自制去离子水,提取乙醇(广源医药,药

5、用规格),其余试剂为分析纯。  2提取工艺  2.1提取方案  准确称取60目桑黄子实体粉末15g,加入一定体积的乙醇,室温下浸泡12h后超声提取,残渣用相同浓度和体积的乙醇再超声提取一次,合并两次提取液,回收乙醇,浓缩液冷冻干燥,得到桑黄提取物。  2.2黄酮的定性反应  2.2.1盐酸-镁粉反应少量提取物用乙醇溶解,加少许镁粉,浓盐酸3~4滴。加入镁粉前溶液呈暗黄色,滴加浓盐酸后有泡沫产生,且升腾的泡沫呈橙红色。  2.2.2浓氨水反应8提取物乙醇溶液点在滤纸上,置于浓氨水上方30s,紫外灯下观察,显黄色荧光斑点。  2.2.3薄板层析提取物乙醇溶液点于硅胶板上,展开剂(正丁醇

6、∶醋酸∶水=4∶1∶5)中展开,置于紫外灯下观察,显黄色荧光斑点。  2.3UV法测定桑黄总黄酮的含量[5]  2.3.1溶液的配制准确称取芦丁标准品23.2mg,用70%乙醇溶解并定容至50ml,作为标准液备用。称取0.8g硼酸和1.0g乙酸钠,用70%乙醇溶解并定容至100ml,作为络合试剂。  2.3.2标准曲线准确吸取标准芦丁溶液0.5,1.5,2.0,2.5,3.0ml,加70%乙醇定容至25ml。分别精密吸取上述溶液5ml,加5ml络合试剂混匀后,384nm处测光密度。  以光密度D为纵坐标,芦丁浓度C(μg·ml-1)为横坐标,绘制标准曲线,得芦丁浓度(C)与光密度(

7、D)关系曲线的回归方程式:D=0.03C-0.0182,R2=0.9992。  2.4正交试验  2.4.1正交试验设计8选取乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间作为4个影响提取的因素,设计L9(34)的4因素3水平正交试验。如表1所示。表1正交试验因素与水平表  2.4.2总黄酮提取率分别准确称取各提取条件下的提取物约17.3mg,加70%乙醇定容至25ml。精密吸取各样品液1.5ml,加70%乙醇定容至25ml。分别精密吸取5ml与5ml络合试剂充分混合,384n

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