超声法提取桑黄总黄酮的工艺研究

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1、超声法提取桑黄总黄酮的工艺研究作者：夏国华，戈延茹，傅海珍，戚雪勇【摘要】目的：研究超声法提取桑黄中总黄酮的最佳工艺。方法：设计正交试验，采用超声辅助提取，对桑黄中总黄酮的提取工艺进行研究。结果：以总黄酮提取率为指标，得出超声法提取桑黄总黄酮的最佳工艺为乙醇浓度70%，提取温度45℃，料液比1∶30，提取时间45min。结论：该工艺提取桑黄中总黄酮，方法简单，耗时短，提取率高。【关键词】桑黄;总黄酮;超声提取;正交设计　　[Abstract]Objective:ThebestextractiontechniqueoftotalflavonoidsfromPhellinusVanin

2、iiwithultrasonicassistedtechniquewasexplored.Methods：Theorthogonaldesignwasusedintheresearchontheultrasonicassistedtechniqueextractiontechnique.Results：Theoptimumconditionsoftheextractionwereasfollows:ethanol70%;extractingtemp45℃;theratioofsolidtoliquid1∶30;extractingtime45min.Conclusion：Thi

3、sprocesswasfeaturedbyhigherextractionrateandshorterextractiontime.8　　[Keywords]PhellinusVaninii;totalflavonoids;ultrasonic;orthogonaldesign　　桑黄属担子菌亚门、多孔菌科,又称桑臣、桑耳、胡孙眼、孔菌等,是一种珍贵的药用真菌，在我国传统中药中用于治疗痢疾、盗汗、血崩等[1]。目前主要应用于肝炎及癌症的治疗，其特有的抗肿瘤活性及低毒性使其成为研究热点[2,3]。桑黄主要化学成分为多糖和黄酮。现有的关于桑黄的文献报道中，提取桑黄总黄酮多采用乙醇浸提或

4、回流提取，试验耗费时间长，且提取率不理想[4]。　　本研究采用超声辅助提取，并对提取条件进行优化。　　1仪器与试剂　　1.1仪器　　KQ250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);RotavaporR200旋转蒸发仪(德国Buchi公司);FD1C50冷冻干燥机(北京博医康技术公司);UV2401型紫外分光光度仪(日本岛津公司)。　　1.2试剂8　　芦丁标准品(南京泽朗，经高效液相色谱法检测纯度大于99%);桑黄子实体(PhellinusVaninii，长白山区杨树野生桑黄，购自延吉长白山特产经营部，本院张朝辉教授鉴定);水为实验室自制去离子水，提取乙醇(广源医药，药

5、用规格)，其余试剂为分析纯。　　2提取工艺　　2.1提取方案　　准确称取60目桑黄子实体粉末15g，加入一定体积的乙醇，室温下浸泡12h后超声提取，残渣用相同浓度和体积的乙醇再超声提取一次，合并两次提取液，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得到桑黄提取物。　　2.2黄酮的定性反应　　2.2.1盐酸-镁粉反应少量提取物用乙醇溶解，加少许镁粉，浓盐酸3～4滴。加入镁粉前溶液呈暗黄色，滴加浓盐酸后有泡沫产生，且升腾的泡沫呈橙红色。　　2.2.2浓氨水反应8提取物乙醇溶液点在滤纸上，置于浓氨水上方30s，紫外灯下观察，显黄色荧光斑点。　　2.2.3薄板层析提取物乙醇溶液点于硅胶板上，展开剂(正丁醇

6、∶醋酸∶水=4∶1∶5)中展开，置于紫外灯下观察，显黄色荧光斑点。　　2.3UV法测定桑黄总黄酮的含量[5]　　2.3.1溶液的配制准确称取芦丁标准品23.2mg，用70%乙醇溶解并定容至50ml，作为标准液备用。称取0.8g硼酸和1.0g乙酸钠，用70%乙醇溶解并定容至100ml，作为络合试剂。　　2.3.2标准曲线准确吸取标准芦丁溶液0.5,1.5,2.0,2.5,3.0ml,加70%乙醇定容至25ml。分别精密吸取上述溶液5ml，加5ml络合试剂混匀后，384nm处测光密度。　　以光密度D为纵坐标，芦丁浓度C(μg·ml-1)为横坐标，绘制标准曲线，得芦丁浓度(C)与光密度(

7、D)关系曲线的回归方程式：D=0.03C-0.0182，R2=0.9992。　　2.4正交试验　　2.4.1正交试验设计8选取乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间作为4个影响提取的因素，设计L9(34)的4因素3水平正交试验。如表1所示。表1正交试验因素与水平表　　2.4.2总黄酮提取率分别准确称取各提取条件下的提取物约17.3mg，加70%乙醇定容至25ml。精密吸取各样品液1.5ml，加70%乙醇定容至25ml。分别精密吸取5ml与5ml络合试剂充分混合，384n