假奓包叶抗菌活性部位提取工艺研究论文

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1、假奓包叶抗菌活性部位提取工艺研究论文赵敏，张元媛，陈晟，张璐，王军宪【摘要】目的筛选假奓包叶抗菌活性部位的最佳分离工艺。方法以没食子酸为检测指标，采用HPLC测定没食子酸的含量，对假奓包叶的提取分离工艺进行研究。结果最佳工艺为：以水作为溶剂，采用温浸法提取.freell)，提取温度为50℃，提取时间8h,.freel.，主产于陕西、甘肃、湖北、湖南、川贵等地1。民间以根皮入药，具有清热解毒、泄水消积的功效，用于治疗水肿、食积、毒疮、鹅掌风等症2。在对其化学成分研究中发现，该植物中含有的结构类型包括黄酮类、有机酸类、三萜类和蒽醌类化合物等，其中，没食子酸的含量较高

2、，且该化合物具有抗菌、杀锥虫、抗肿瘤、清除自由基和抗氧化等药理活性3～6。故本研究以没食子酸含量作为指标，对假奓包叶叶中的抗菌活性成分的提取工艺进行初步研究和探讨。1仪器与试药LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津公司);AE240S型电子分析天平(瑞士METTLER公司);HS6150D超声振荡仪(天津市恒奥科技发展有限责任公司);RE-52型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);HH-4型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);SHZ-D循环水真空泵(河南巩义市英峪予华仪器厂)。假奓包叶采于陕西汉中地区，经西安交通大学医学院药学系天然药物化学研究室王军宪教授鉴定

3、为大戟科植物假奓包叶Discocleidionrufescens(Franch.)PaxetHoffm.的叶;没食子酸对照品(实验室自制，纯度98%);高效液相用甲醇为色谱纯;蒸馏水自制;其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1含量测定2.1.1色谱条件色谱柱为DikmaDiamonsilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(5∶95)，检测波长为269nm;流速为1.0ml·min-1;柱温为25℃。2.1.2对照品储备液的制备精密称取没食子酸对照品21.8mg，置于50ml的容量瓶中，用甲醇配成浓度为0.436mg·ml

4、-1的对照品储备液，备用。2.1.3供试品溶液制备取干燥假奓包叶叶粗粉1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水20ml，50℃下温浸提取8h，放冷，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml至蒸发皿中，蒸干，残渣用甲醇转移并定容至5ml容量瓶内，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。2.1.4标准曲线及线性关系考察精密吸取对照品储备液0.10，0.80，1.60，2.50，3.75，5.00ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别精密吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以没食子酸对照品浓度(mg·ml-1)为横坐标，峰

5、面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=3×107X+50865(r=0.9996)，表明没食子酸的浓度在0.004～0.2180mg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系。2.1.5精密度实验精密吸取上述“2.1.4”项浓度为0.1090mg·ml-1的对照品溶液，重复进样5次，10μl/次，平均峰面积为386573，RSD为0.44%，说明仪器精密度良好。2.1.6重复性实验取同批号的假奓包叶叶样品5份，依法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定，并按外标法计算，结果测定没食子酸的平均含量为0.427%，RSD为2.17%。2.1.7稳定性实验取没食子

6、酸对照品溶液，分别在0，2，4，6，8，12，24h进样1次，依法测定，平均峰面积为3105072，RSD为0.60%，说明没食子酸稳定性较好。2.1.8加样回收率实验精密称取假奓包叶叶粗粉1g(相当于没食子酸约0.2mg)，准确加入0.2mg没食子酸对照品，按“2.1.3”项下方法制备供试品5份，分别进样10μl，测定峰面积，计算加样回收率。结果平均回收率为100.6%，RSD为1.68%。2.2提取工艺首先对提取溶剂和提取方法进行了筛选，并在此基础上采用正交法对提取工艺进行优选。选取5个对提取率影响较大的因素(粉碎度、液料比、温度、时间和次数)、每个因素选择

7、3个水平进行考察，按L18(37)表安排实验，以没食子酸的含量为实验指标，筛选抗菌部位的最佳提取工艺。2.2.1提取溶剂的选择取1g假奓包叶粗粉3份，精密称定，分别置100ml圆底烧瓶中，各加入蒸馏水、95%乙醇、70%酸性乙醇(用盐酸调pH值为2)30ml，置水浴锅中回流提取2h，提取1次。提取完毕，过滤，精密吸取续滤液5ml置蒸发皿中，在80℃水浴中蒸干，用甲醇溶解残余物，转移并定容至5ml容量瓶中，经微孔滤膜过滤后，按“2.1”项下含量测定方法测定其含量，并按以下公式计算没食子酸的产率。没食子酸的产率(%)=没食子酸含量(mg·ml-1)×体积(ml)药材

8、重量(mg)×100%2