广西木薯叶总黄酮提取工艺及抗菌性研究

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1、广西木薯叶总黄酮提取工艺及抗菌性研究摘要：采用正交试验优化广西木薯（ManihotesculentaCrantz）叶中总黄酮提取的最佳工艺，并在此条件下提取木薯叶总黄酮进行抗菌性试验。结果表明，液料比1∶25（V∶m），乙醇体积分数60%，提取时间100min的条件下木薯叶中总黄酮含量最高，达到25.23mg/g;抗菌性试验表明，木薯叶总黄酮对金黄色葡萄球菌有较高的抑菌作用。关键词：木薯（ManihotesculentaCrantz）叶;总黄酮;提取;抗菌中图分类号：S533文献标识码：A文章编号：0

2、439-8114（2014）23-5816-04DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.23.049木薯（Manihotesculenta9Crantz）又叫树薯、木番薯，地下部结薯，属于大戟科木薯属植物[1]。木薯是中国主要的热带作物之一，已被确认为广西重要的非粮食能源作物，其种植面积迅速扩大，成为我国“十一五”重点发展的产业之一。然而，大规模的种植和加工利用产生大量的茎杆和叶等农副产品，它们没有得到充分利用而成为废弃物，这些废弃物往往被丢弃或是直接焚烧，既污染

3、了环境，又浪费了资源。研究表明，食用木薯叶可提高抗病能力，减少患癌症及糖尿病、高血压等疾病的几率[2]。可见木薯除其块根部分外，其他没有充分利用的部分有可能含有有效的药用成分。研究发现，木薯叶中含有黄酮类化合物[3，4]，本研究采用正交试验法研究了广西木薯叶中黄酮类化合物的提取方法，同时进行了抗菌性研究，为进一步开发利用木薯叶提供参考。1材料与方法1.1材料木薯叶采自广西桂北地区，经广西中医药大学郭敏副教授鉴定为大戟科（Euphorbiaceae）木薯属木薯（ManihotesculentaCrant

4、z）的叶子，洗净后经50℃干燥48h后粉碎备用。1.2试剂金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）ATCC26003，金黄色葡萄球菌耐药株（Staphylococcussusceptivestrain），宋内氏痢疾杆菌（Shigellasonnei），绿脓杆菌（Pseudomonasaeruginosa）ATCC27853，以上菌株均由广西中医药大学微生物免疫学教研室提供;营养肉汤（批号20100821）、营养琼脂（批号201008131）、水解酪蛋白（MH）肉汤（批号2010090

5、22）均购自广东环凯微生物科技有限公司;芦丁对照品（批号100080-200707）购自中国药品生物制品检定所。995%乙醇、H2SO4（批号T20090811）、二甲基亚砜（DMSO，批号T20100126）均购自国药集团化学试剂有限公司，BaCl2・2H2O（批号20071107）购自广州新建精细化工厂。1.3仪器与设备SHZ-D型循环水式真空泵，KQ5200B型超声波清洗器，98-1-B型电子调温电热套立式压力蒸汽灭菌器，SW-CJ-1F超净工作台，BP211D型电子分析天平，游标卡尺（0～20

6、0mm），Agilent8453型紫外-可见分光光度计。1.4方法1.4.1木薯叶总黄酮标准曲线的绘制精确称取120℃干燥至质量恒定的芦丁标准品5.7mg，用60%乙醇溶液定容至10mL，得到质量浓度0.57mg/mL的标准品溶液。精确吸取上述标准品溶液0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL分别置于10mL容量瓶中，分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0mL60%乙醇溶液，加5%NaNO2溶液0.5mL，摇匀放置6min，再加10%Al（NO3）3溶液0.5mL，摇匀，放置6min

7、，加4%NaOH溶液4mL，加60%乙醇溶液定容，摇匀放置15min，在504nm波长处测定吸光度A，绘制总黄酮质量浓度与吸光度的标准曲线[5-7]。1.4.2总黄酮提取的工艺流程木薯叶碎叶→热浸提→过滤→提取液→浓缩→干燥→木薯叶总黄酮。1.4.3单因素试验9分别研究液料比（溶剂体积：原料质量，下同）、乙醇体积分数、提取时间对木薯叶总黄酮含量的影响。总黄酮含量（mg/g）=■式中，C表示质量浓度（mg/mL），v表示显色液的体积（mL），V表示乙醇的体积（mL），m表示所用木薯叶的质量（g）。1.4

8、.4正交试验根据单因素试验结果，确定以液料比（A）、乙醇体积分数（B）、提取时间（C）为试验因素，进行正交试验L9（34）（表1），优化木薯叶总黄酮的提取工艺。1.4.5验证试验精确称取木薯叶粉末2.00g，在正交试验所得最佳提取工艺条件下提取木薯叶总黄酮，计算总黄酮含量。1.4.6木薯叶总黄酮的抗菌性测定1）培养基的制备：将营养琼脂33g加入1000mL去离子水中，加热溶解并调节pH为7.4～7.6，于0.15MPa下高压灭菌25min。2）菌液的制备