qs1300抗坏血酸(ascorbic acid,asa)含量测定试剂盒说明书

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1、货号：QS1300规格：50管/48样抗坏血酸（ascorbicacid，AsA）含量测定试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。试剂二：液体×1瓶，4℃保存。试剂三：液体×1瓶，4℃保存。临用前加入5mL试剂二，混匀。标准品：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前配制，加入5.679mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1mL上述溶液，加入0.9mL蒸馏水，混匀，即100μmol/LAsA。产品说明:AsA又称维生素c。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/

2、受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。抗坏血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。自备仪器和用品：研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。操作步骤：一、样品中AsA提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心20

3、min，取上清置冰上待测。2.细菌、真菌：按照细胞数量（10个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。3.血清等液体：直接测定。二、AsA测定操作：1.分光光度计预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min。3.标准管：依次在比色皿中加入100μL标准液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀，在265n

4、m测定，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A标准管=A1－A2。4.测定管：依次在比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A3和A4，△A测定管=A3－A4。第2页，共2页注意：标准管只需测定一次。三、AsA含量计算公式:(1)按蛋白浓度计算AsA(nmol/mgprot)=[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷（Cpr×V样）=100×△A测定管÷△A标准管÷Cpr(2)按样本质量计算AsA(nmol/g)=[C标准液×△A测定管

5、÷△A标准管×V标准]÷(W×V样÷V样总)=100×△A测定管÷△A标准管÷W(3)按细胞数量计算AsA(nmol/104cell)=[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷(细胞数量×V样÷V样总)=100×△A测定管÷△A标准管÷细胞数量（4）按液体体积计算AsA(nmol/mL)=[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷V样=100×△A测定管÷△A标准管C标准液：100μmol/L；V标准：标准液体积，0.1mL；V样总：上清液总体积，1.0mL=0.001L；V样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；C

6、pr：蛋白含量，mg/mL；W：样品质量，g。注意事项：1.试剂三和标准品现配现用，配制好的4℃保存，3天内使用完。2.最低检出限为10μmol/L。第2页，共2页