百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白表达影响及意义

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1、百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白表达影响及意义【摘要】目的观察百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)表达的影响，探讨百令胶囊肾脏保护作用的可能机制。方法雄性3个月龄SD大鼠90只，随机分为：对照组(30只)，模型组(30只)，预防组(30只)，以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型，预防组加以1．5g/(kg•d)百令胶囊溶于生理盐水灌胃以预防肾小管间质纤维化；对照组以等体积的2%淀粉溶液和生理盐水灌胃。分别于实验第7、12、17周时随机处死10只大鼠，进行血肌酐

2、(creatinine，Cr)、尿素氮(bloodureanitrogenBUN)，24h尿蛋白定量和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(N-acetyl-β-D-glucosaminidase，NAG)酶检测，光镜下观察肾组织的病理变化及免疫组织化学法检测肾脏转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-beta1，TGF-β1)、α-SMA的表达情况。结果①功能学变化：与对照组比较，各时相点模型组、预防组大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高(P50%。每张切片取10个视野的平均积分，再在各组取平均值。�1．4免疫组化6采用链霉亲和

3、素-生物素-过氧化物酶(SABC)法检测肾组织中的TGF-β1和α-SMA，操作步骤按SABC试剂盒说明书进行。光镜下组织切片呈棕黄色颗粒性沉积区域为阳性染色部位。TGF-β1和α-SMA染色结果在高倍镜(×200)下随机选择20个不重叠的视野，采用半定量评分[3]。TGF-β1半定量评分标准：0分：无染色；1分：染色面积75%，弥漫染色。各试剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。�1．5统计学方法各组数据均采用均值±标准差(x±s)表示，组间比较采用两组独立样本的t检验(双侧)和方差分析，由SPSS10．0统计软件进行统计学处理。�2结果�2．1生化指标检测实验大鼠

4、24h尿蛋白、尿NAG酶、血BUN、Cr含量变化,见表1。�2．2肾脏组织病理改变6对照组肾小管间质基本正常。实验7周时，模型组和预防组大鼠肾脏肾小管扩张，间质单核细胞浸润、水肿，可见间质纤维组织灶性增生。12周时，模型组和预防组肾小管扩张明显，肾小管上皮空泡或颗粒性变性，基底膜断裂，小管间质区域增宽，纤维化明显。17周时，模型组和预防组两组大鼠肾脏病理检查均可见肾小管明显萎缩及消失，间质广泛纤维化。7、12周时，预防组大鼠肾脏病理改变均较模型组轻。17周时，模型组和预防组大鼠肾脏病理改变差异无统计学意义(P=0．670)。各时相点，各时相点模型组和预防组大鼠肾间质

5、损害半定量分析见表2。�2．3肾组织免疫组化变化（TGF-β1、α-SMA），见表3。�3讨论�肾小管间质纤维化的发生是个复杂的病理生理过程，其机制尚未完全清楚。1952年，Philips建立腺嘌呤致大鼠肾功能衰竭模型,现已成为研究肾小管间质纤维化病理机制的理想动物模型。本实验以腺嘌呤150mg/(kg•d)灌胃1次，连续17周。实验第7周时，模型组尿蛋白排泄量、尿NAG酶水平高于对照组。病理改变显示，肾小管有沉积物出现，肾皮质出现异物肉芽肿，灶性小管扩张、间质单核细胞浸润、轻度纤维组织增生，而此时血BUN、Cr水平和对照组比较无明显差异。随着时间的推移

6、，病情的进展，至12周时，模型组血BUN、Cr等指标进一步增高，肾脏病理改变进一步加重，小管萎缩、扩张，间质纤维组织明显增加。17周时，模型组肾功能明显减退，间质大量纤维组织增生，肾小管结构消失。模型组大鼠肾脏TGF-β1表达量呈增加趋势，实验结果显示，肾小管间质纤维化动物模型制作是成功的，和楚非[1]报道相似。�6据文献报告，肾间质纤维化的主要表现有肾脏固有细胞消失、肌成纤维细胞增多、细胞外基质沉积等[4]。肌成纤维细胞在纤维化肾组织的广泛存在及其在的重要意义已为众多实验所证实。所谓肌成纤维细胞是形态上介于成纤维细胞和平滑肌细胞之间的细胞，该细胞表达α-SMA。在

7、人肾组织研究中，发现肾小管间质内α-SMA表达量与肾小管间质纤维化的程度以及肾功能恶化程度呈正相关关系[5]。有文献报道，在实验大鼠肾小管受损和肾间质纤维组织增生较明显区域检测到了α-SMA阳性细胞，表明肌成纤维细胞的积聚发生在纤维组织增生较明显部位，肌成纤维细胞在肾小管间质纤维化中发挥着重要作用，且与肾脏功能有一定相关关系[6-10]。本实验免疫组化结果显示，模型组7周时α-SMA表达已明显增多，12、17周时α-SMA表达量进一步增加。α-SMA的变化与肾病理、肾功能、尿蛋白的变化相一致，即α-SMA高表达者，其病理重、SCr、BUN、尿NAG或尿蛋白值就高