肾清饮对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠肾脏tgfβ1及timp1表达的影响

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1、肾清饮对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠肾脏TGFβ1及TIMP1表达的影响【关键词】肾清饮;肾间质纤维化;转化生长因子β1;金属蛋白酶组织抑制物1　　ABSTRACT:ObjectiveTostudythepossiblemechanismofShenqingyinsinhibitingrenalinterstitialfibrosis.MethodsRenalinterstitialfibrosisinratsinistrationofadenine,andthentheratsunderadethepathologicalexaminationofrenaltissue

2、s,usedimmunohistochemistryandRTPCRtoobservetheexpressionsoftransforminggroetalloproteinase1(TIMP1)inrenaltissues.ResultsThedegreeofrenalinterstitialfibrosisilderinShenqingyingroupthaninmodelcontrolgroup.ImmunohistochemistryandRTPCRresultsshoodelcontrolgroup(P<0.05).ConclusionShenqing

3、yincaninhibitrenalinterstitialfibrosisbydecreasingtheexpressionsofTGFβ1andTIMP1inthekidney.　　KEYP1)　　肾间质纤维化是各种原因引起的肾脏疾病持续进展并最终发展成为终末期肾病的共同途径和主要病理基础[1]。肾间质纤维化的治疗药物种类较多，但疗效并不满意。中药肾清饮的临床观察结果显示，该药能有效地保护肾功、延缓肾衰竭的进展。本研究通过建立腺嘌呤灌胃致大鼠肾间质纤维化模型，给予中药肾清饮干预治疗，观察肾清饮对肾组织转化生长因子β1(transforminggroetallopro

4、teinase1,TIMP1)的影响，探讨肾清饮抗肾间质纤维化的部分机制。　　1材料与方法　　1.1实验动物、主要试剂及药品雄性SD大鼠56只，体重180～200g，清洁级，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。造模试剂药品：腺嘌呤(Amerisco公司);肾清饮(黄芪、当归、川芎、藏红花、大黄、芍药、地龙等中药组成)，制成水煎浓缩液，每毫升含生药2.4g，4℃冰箱保存备用;盐酸苯那普利(北京诺华制药有限公司)。ET1放免试剂盒(北京科美东雅生物技术有限公司)。RTPCR试剂：总RNA提取Trizol试剂(Invitrogen公司)，逆转录试剂盒及TaqDNA聚合酶(

5、Fermentas/MBI公司)。引物设计：①3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)上游5′CATAGACAAGATGGTGAAGG3′，下游5′TCCACAGTCTTCTGAGTGGC3′，570bp;②COLⅠ上游5CCTACAGCACGCTTGTGGAT3，下游5′ATTGGGATGGAGGGAGTTTA3′，193bp;③COLⅢ上游5′TCAAGAGCGGAGAATACTGG3′，下游5′TATGTAATGTTCTGGGAGGC3′，295bp;④TGFβ1上游5′AGCCTGCTTCTTGAGTC3′，下游5′AGGAAAGGTAG

6、GTGATA3′，241bp。引物由上海生物工程公司合成。　　1.2动物分组和标本采集56只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肾清饮预防组、肾清饮低剂量组、肾清饮高剂量组、盐酸苯那普利组、肾清饮+盐酸苯那普利组，共7组，每组8只，其中后5组统称药物干预组。腺嘌呤：腺嘌呤用20g/L淀粉悬液配成，灌胃剂量250mg/(kg·d);肾清饮(低)：按生药折算每100g大鼠体重灌胃肾清饮1g/d;肾清饮(高)：按生药折算每100g大鼠体重灌胃肾清饮3g/d;盐酸苯那普利：盐酸苯那普利灌胃10mg/(kg·d)。造模过程中正常对照组、肾清饮低剂量组、肾清饮+盐酸苯那普利组各死亡大鼠

7、1只，模型组死亡2只。6周结束前1d，将大鼠置于代谢笼中收集24h尿液。6周结束时乙醚麻醉大鼠，下腔静脉采静脉血，取双肾，部分置于40g/L多聚甲醛固定，部分液氮冻存。　　1.3病理染色及免疫组化检测固定于40g/L多聚甲醛的肾组织，经脱水，包埋，切成4μm的切片，进行HE、Masson病理染色，并行SABC法免疫组化染色检测TGFβ1及TIMP1，操作按照说明书进行;采用德国LeicaQP1引物，在TaqDNA聚合酶催化下进行PCR，取8μLPCR产物在15g/L琼脂糖凝胶上电泳，美国SYNGE