肾衰胶囊改善慢性肾衰大鼠肾间质纤维化的影响

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1、肾衰胶囊改善慢性肾衰大鼠肾间质纤维化的影响作者:李莲花,李淑菊,王今朝,于卓,张佩青【摘要】目的观察肾衰胶囊改善肾间质纤维化的作用。方法采用腺嘌呤混悬液制作大鼠肾功能衰竭模型,通过中药肾衰胶囊治疗,观测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、转化生长因子(TGF-β1)及病理改变。结果肾衰胶囊组与尿毒清组比较,能显著降低SCr、BUN(P<0.05),显著减少肾组织对TGF-β1的表达(P<0.05),改善肾脏纤维化程度。结论肾衰胶囊对改善慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化有一定的治疗作用。【关键词】肾衰胶囊;慢性肾功能衰竭;肾间质

2、纤维化;动物模型慢性肾功能衰竭(CRF)是慢性肾脏疾病引起的肾功能损害,肾脏疾病进展到CRF的机制尚未完全阐明,但近年的研究显示肾间质病变与CRF进展关系密切,几乎所有肾脏疾病进展到肾功能衰竭终末期都会出现肾脏纤维化。  1材料和方法8  1.1动物  选用雄性Wistar大鼠,体重200~240g,购自黑龙江中医药大学实验动物中心。  1.2药物及试剂  肾衰胶囊,0.5g/粒,黑龙江省中医研究院制剂室生产并提供(批号:黑药制字[2004]Z第0010号)。尿毒清颗粒,5g/袋,广州康臣药业有限公司生产(批号z10970122)。腺嘌呤

3、,50g/瓶,美国AMRESCO公司生产(批号0272B31)。兔抗大鼠TGF-β多克隆抗体,武汉博士德生物工程公司提供。山羊抗兔IgG抗体-HRP多聚体,北京中山生物技术有限公司提供。  1.3分组  取Wistar雄性大鼠60只,进入实验后适应性饲养1周,随机分为5组,每组12只。即正常组、模型组、尿毒清组、肾衰胶囊低剂量治疗组、肾衰胶囊高剂量治疗组。  1.4造模及给药  8  除正常组外,其余组予2.5%腺嘌呤混悬液,按250mg/(kg?d)灌胃,正常组给予等量蒸馏水,连续用药21d,第22天眶底静脉丛取血0.5mL,测血肌酐(

4、SCr)、尿素氮(BUN),证实造模成功,造模过程中大鼠死亡8只。造模结束后开始治疗,大鼠给药剂量按每公斤体重占体表面积比值算得,肾衰胶囊低剂量组为临床等效组,按1.35g/(kg?d)灌胃,浓度为13.5%,高剂量组为其3倍,浓度为40.5%。尿毒清组按1.81g/(kg?d)灌胃,浓度为20%。正常组、模型组给予2mL蒸馏水灌胃。共治疗60d,治疗过程中大鼠自由进食、水。治疗中模型组死亡2只,尿毒清组死亡1只。  1.5实验取材  禁食水24h,摘眼球取血5~6mL,取血后脱颈椎处死大鼠,迅速腹部开口剖取双肾,纵向切开右肾,取一部分投

5、入4%多聚甲醛固定24h,切成厚度为2mm的组织块,梯度酒精脱水,石蜡包埋、切片,脱蜡后进行HE染色及免疫组织化学检测。  1.6统计学方法  采用SPSS11.5forwindows统计软件进行统计分析。结果用x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较用q检验,等级资料用Ridit分析。8  2结果  2.1实验大鼠造模后SCr、BUN比较  (见表1)表1造模后各组大鼠SCr、BUN比较(略)注:与正常组比较,※P<0.01。  2.2用药后各组大鼠Scr、BUN比较  (见表2)表2用药后各组SCr、BUN比较(略)注

6、:与模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与尿毒清对照组比较,○P<0.05(下同)。  2.3免疫组化  应用CMIAS多功能真彩色病理图像分析系统进行半定量分析,高倍视野(200×)据染色面积和程度进行半定量分析。无阳性染色(-),轻度阳性染色(+),中度染色(++),重度阳性染色(+++),分别对结果赋分:1分(-),2分(+),3分(++),4分(+++)。PBS代替一代作阴性对照,正常肾组织在髓质交界处的肾小管上皮细胞胞浆有少量表达,模型对照组大鼠TGF-β1表达遍布皮髓质处损伤肾小管上皮细胞胞浆,2,

7、8二羟基腺嘌呤结晶周围增生的单核巨噬细胞也有表达,经治疗表达减弱,其中高剂量组表达最弱。结果见表3。表3用药后各组大鼠TGF-β81表达比较(略)  2.4肾脏组织HE染色观察  正常组中肾小管上皮细胞排列整齐,肾间质无纤维化组织增生,肾小管管腔无结晶物质沉积。模型组肾小管上皮细胞萎缩、变性、坏死、肾小管部分扩张,管腔内可见多数棕褐色结晶物质沉积,间质大量炎症细胞浸润,间质纤维组织成束状、成片状增生。尿毒清对照组与肾衰胶囊低剂量组中肾小管扩张,部分萎缩,间质有部分炎症细胞浸润,纤维组织中度增生,肾小管管腔可见较多的棕褐色结晶。肾衰胶囊高剂

8、量组:肾小管上皮细胞轻度萎缩、变性,间质有极少量的炎症细胞散在分布,纤维组织增生不明显,个别管腔中有棕褐色结晶。  3讨论  CRF是由于各种原因导致脾肾受损,二便失司,三焦气化失调,分清泌浊

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