骨髓间充质干细胞在肾小管间质纤维化大鼠模型中肾脏分布的分析

《骨髓间充质干细胞在肾小管间质纤维化大鼠模型中肾脏分布的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、四川大学临床医学硕士学位论文刖吾肾脏小管间质纤维化(tubulo—interstitialfibrosis，TIF)几乎是所有慢性肾脏疾病(chronicrenalfailure，cRD)发展的最终结果，是导致终末期肾功能衰竭(end．stagerenaldisease，ESRD)的主要原因之一。T口病理特征为肾小管萎缩或扩张、间质毛细血管丧失、细胞外基质堆积、单核巨噬细胞浸润【l

2、z]。研究表明肾小管间质损害程度是判断大多数原发或继发性’肾小球疾病预后的主要决定因素，比肾小球病变与肾功能的相关性更为密切[“。尽管许多CRD患者在远没有发展到终末期肾功能衰竭时即得到诊断，要完全阻断TI

3、F仍是临床治疗的难题。目前针对TIF治疗的研究集中在通过药物干预调节细胞因子活性，抑制细胞外基质积聚及促进其降解；肾脏移植和基因治疗。上述治疗都存在局限性。迄今为止，除ACEI、ARB等少数几类药外。能进入临床抗纤维化的药物甚少，且上述药物只能延缓纤维化的进展【3】；肾源缺乏、免疫抑制剂副作用大、免疫抑制剂费用昂贵，手术并发症及由于等待移植时间过长造成透析相关移植效果差等，限制了肾移植的开展；基因治疗未能解决向肾脏细胞特异性靶向导向的介体，距离临床应用尚有一定的距离【4。5】。因此，寻求有效治疗TIF的新手段具有十分重要的意义。近年来，基于组织工程技术发展起来的细胞基因治疗是医学领域乃

4、至整个生命科学领域的研究热点，为人类征服多种疾病提供了新的途径和希望。理想的种子细胞要求是①取材方便；②有较强的体外扩增能力；③靶向定位到受损区域并长期存活；④能在受损区完全替代损伤细胞的功能。骨髓中有一类能够分化为多种骨髓间质成分的非造皿多能干细胞，骨髓间充质干细胞(bonemarrowderivedmesenchymalstemcells，BM-MSCs)，是中胚层发育的早期细胞。研究者发现体外培养的MSCs四川大学临床医学硕士学位论文不仅可以分化为间充质细胞，还可以分化为脏壁中胚层、内胚层和神经外胚层细胞，且这些MSCs经过10个培养周期仍能保持其多向分化潜能【64J。由于MSC

5、s取材容易，对机体损伤小，植入体内能耐受机体免疫，无致瘤性，是细胞和基因治疗理想的靶细胞【10]。直接的损伤刺激对诱导干细胞分化具有重要作用，组织损伤的特异性和严重程度可影响干细胞分化和参与组织损伤修复的潜能。推测可能损伤的组织释放特异性因子，驱动骨髓干细胞迁移到损伤部位参与修复UH2]。研究证实在急性肾脏损伤中骨髓干细胞可以被诱导分化成肾脏细胞。sujataK等观察到肾脏缺血再灌注损伤可以动员经眶后静脉移植的骨髓干细胞迁移到肾脏并表达近端小管上皮细胞标志物megalin，表明骨髓干细胞可以分化为肾小管上皮细胞修复缺血性肾小管损伤[1”。MorigiM等发现在顺铂诱导的急性肾功能衰竭小

6、鼠模型中，MSCs归巢到肾脏分化为’肾小管上皮细胞，减轻上皮损害改善肾功能，促进ARF的结构修复【14】。研究者应用甘油诱导急性肾小管上皮损伤的小鼠模型，静脉注射表达绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)的骨髓间充质干细胞，发现MSCs位于肾小管上皮细胞间并表达小管细胞特异性标志物cytokeratint”I。但在肾小管间质纤维化中，移植的骨髓间充质干细胞能否分化为肾脏细胞改善纤维化进程，还没有文献报道。既往认为长期纤维化可以阻碍组织再生，新近研究发现心脏由于生长因子和细胞因子如TGF-／3的调节作用，纤维化环境实际上促进干细胞存活、增殖、迁移和分化【1

7、6】。有实验证明间充质干细胞可以靶向定位于博来霉素诱导的肺损伤处，降低炎症和胶原沉积程度，阻止纤维化效应‘”l。为此我们推测肾小管间质纤维化微环境可以诱导骨髓间充质干细胞归巢到肾脏并分化为正常肾脏细胞，延缓纤维化的进展。7四川大学临床医学硕士学位论文本实验体外扩增MSCs，探讨扩增条件和鉴定方法。通过单侧输尿管结扎建立大鼠肾间质纤维化模型，经鼠尾静脉注射体外扩增的间充质干细胞，了解干细胞是否可以在肾间质纤维化初期靶向定位于梗阻的肾脏及存活时间，为今后的研究提供理论和实验依据。四川大学临床医学硕士学位论文技术路线四川大学临床医学硕士学位论文材料与方法1．试剂与材料1．1主要试剂低糖DME

8、M于粉剂(GIBCO公司)HEPES(Sigma公司)胎牛血清(GIBCO公司)谷氨酰胺(GIBCO公司)胰蛋白酶(Sigma公司)MTT(Sigma公司)地塞米松10‘7M(GIBCO公司)维生素C(GIBCO公司)B一甘油磷酸钠(GIBCO公司)小鼠抗大鼠CD31单克隆抗体：FITC(Serotec公司，小鼠IgGl)小鼠抗大鼠CD44单克隆抗体：FITC(Serotec公司，小鼠IgGl)小鼠抗大鼠CD45单克隆抗体：FITC(Serot