水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠

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1、水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠【摘要】目的探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠小管上皮-间质转分化的干预作用。方法利用单侧输尿管梗阻诱导建立肾小管间质纤维化大鼠模型，实验SD大鼠随机分为梗阻组24只、治疗组24只、假手术组8只，梗阻组和治疗组分别于实验第7天、14天、21天各收获动物8只，假手术组于第21天一次处死动物，进行肾组织病理学观察，利用免疫组织化学对转化生长因子-β1(TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肾小管间质纤维化大鼠中的表达变化进行动态观察及水飞蓟素的干预影响。结果实验第7天梗阻组大鼠即表现出小管损伤和炎症细胞浸润（P&

2、lt;0.05）,随病程进展，上述病变呈进行性加重（P<0.05），水飞蓟素治疗组动物在各时间点组织学的改善同梗阻组相比有明显减轻（P<0.05）。免疫组织化学显示水飞蓟素在各观察时间点能显著下调TGF-β1和α-SMA在肾小管间质中的表达（P<0.01）。结论水飞蓟素通过下调TGF-β1的表达，有效干预上皮-间质转分化达到改善肾脏纤维化的作用。【关键词】水飞蓟素肾小管间质纤维化肾小管上皮-间质转分化转化生长因子-β1【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectofsilymarinonepitheli

3、al-mesenchymaltransition(EMT)inratslydividedintothreegroups:operatedgroup(n=24),silymarintreatedgroup（n=24）andsham-operatedgroup(n=8).Renaltubulointerstitialfibrosismodelinethehistologicalchangesofrenaltissue,butall8ratsinsham-operatedgroupicroscope.Theexpressionoftransformingg

4、rooothmuscleaction(α-SMA)inrenaltissueinedmunohistochemicalmethod,respectively.ResultsRenalinterstitiuminjuryeaggravatingafterday7.Thedegreeofrenaltubulointerstitialfibrosisinratsfromtreatedgroup-operatedgroup,theexpressionofTGF-beta1andα-SMAarintheup-regulatingabovementionedpa

5、rametersarinmaybeattenuatetherenaltubulointerstitialfibrosisthoughthemechanismbydotransdifferentiationtomyofibroblast.【Keyarintubulointerstitialfibrosisepithelial-mesenchymaltransitiontransforminggrog/kg麻醉，取左旁正中切口剪开腹壁，以4号手术线将左输尿管近端两处结扎。假手术组同样处理但不结扎。其中治疗组于术前30分钟开始给予水飞蓟素30mg/kg灌胃

6、,每日一次；假手术组和梗阻组给予等量生理盐水灌胃处理。UUO大鼠于术后第7天、14天、21天随机收获8只，假手术组于第21天一次处死。取肾脏，10％多聚甲醛固定。光镜下观察肾组织的病理变化和免疫组织化学法检测肾脏TGF-β1及α-SMA的表达情况。实验过程中梗阻组第14天、21天时间点各死亡大鼠1只。1.2肾脏组织病理肾组织切片进行HE染色和Masson染色，光镜下观察。在IDA-2000高清晰度数码纤维图像分析系统下计算肾小管间质纤维化相对面积。高倍镜（×200）下每张切片随机选取10个不重叠视野测定小管间质纤维化面积与同视野小管间质总面积的百分比

7、，进行半定量评分[2]，取其平均积分为每张切片评分。评分标准：0分：无病变；1分：<25％；2分;26~50％；3分：>50％。1.3免疫组化采用SABC法检测肾组织中的TGF-β1和α-SMA，操作步骤按SABC试剂盒说明书进行。光镜下组织切片呈棕黄色颗粒性沉积区域为阳性染色部位。高倍镜（×200）下在每张不包含肾小球和血管的肾小管间质区域随机选取10个不重叠的视野，应用IDA-2000高清晰度数码图像分析系统进行图像采集，经灰度变换将阳性染色区域面积与该视野总面积百分比，计算平均值作为该样本的百分比值。1.4统计学处理各组数据均采用均

8、数±标准差（）表达，组间差异采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验法。由SPSS11.5统计软件进行