红花对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用

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1、红花对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用作者：许庆友潘莉王月华王香婷王筝谷艳丽张磊磊丁英钧赵京山杜明华【摘要】目的目的观察红花对结扎单侧输尿管诱导的肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用。方法结扎单侧输尿管方式复制肾间质纤维化实验动物模型，分别给以红花4.0g·kg-1·d-1、缬沙坦10mg·kg-1·d-1经口灌服，采用免疫组化、原位杂交方法检测大鼠肾脏肾小管上皮细胞表型转化标志物α平滑肌肌动蛋白(αSMA)及Ⅲ型胶原的表达。结果单侧输尿管结扎大鼠肾脏αSMA动蛋白和Ⅲ型胶原的阳性面积及积分光密度较假手术组明显增强，

2、红花及缬沙坦可显著性抑制其表达。结论红花可以通过抑制肾小管上皮细胞的表型转化拮抗肾间质纤维化。【关键词】单侧输尿管结扎；肾间质纤维化；肾小管上皮细胞表型转化；红花；α平滑肌肌动蛋白【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectofSaffloyofibroblasttransdifferentiationinrenalinterstitialfibrosisratsinducedg·kg-1·d-1)respectively.Themarkerofepithelialmyofibroblasttransdifferentiat

3、ionαsmoothmuscularactin(αSMA)andcollagenⅢinedbyimmunohistochemicalmethodandinsituhybridization.ResultsThepositiveareaanddensityofαSMAandcollagenⅢinUUOratsincreasedmarkedlythanthoseinshamoperationgroupandcouldbeinhibitedbySaffloyofibroblasttransdifferentiation.【Keyyofibroblasttra

4、nsdifferentiation;Safflooothmuscularactin(αSMA)成纤维细胞是肾间质纤维化的主要效应细胞。有证据显示，肾间质的成纤维细胞大部分是通过上皮细胞表型转化而来，有效地抑制肾小管上皮细胞的表型转化对减缓肾间质纤维化的进展有着重要的意义〔1〕。采用血管紧张素转换酶抑制剂及血管紧张素受体拮抗剂抑制肾小管上皮细胞表型转化的研究已有大量的报道，采用中药单体或复方抑制体外细胞表型转化的研究也较多〔2，3〕，但体内研究开展的较少，对此，本研究采用单侧输尿管结扎（UUO）方式复制肾间质纤维化实验动物模型，观察实验动物体内肾小管上皮细胞

5、表型转化标志物α平滑肌肌动蛋白(αSMA)的表达以及由此引起的细胞外基质成分——Ⅲ型胶原的变化，给以活血化瘀中药红花治疗，从而证实红花拮抗肾间质纤维化的作用与抑制肾小管上皮细胞表型转化有关。1材料与方法1.1实验动物及分组健康8周龄SD大鼠40只，雌性，体重(180±10)g，清洁级动物，由河北医科大学动物中心提供。适应性喂养1g/kg的剂量腹腔注射麻醉，于左侧中腹部切开皮肤，仅将输尿管游离但不结扎离断。模型组：麻醉如前，于左侧中腹部切开皮肤，游离左侧输尿管，在输尿管上1/3处分别用丝线结扎两道，切断输尿管，逐层缝合皮肤。缬沙坦组：造模同模型组，于造模前

6、1d起给予缬沙坦10mg·kg-1·d-1经口灌服。红花组：方法同缬沙坦组，给予红花4.0g·kg-1·d-1经口灌服，模型组及假手术组给以等量生理盐水经口灌服。各组于第14天处死动物，取左侧肾脏以4%多聚甲醛固定、包埋、切片，行HE及Masson染色进行病理学观察，并采用免疫组化及原位杂交方法检测αSMA、Ⅲ型胶原的表达。1.5免疫组化方法SABC法。半定量分析:采用HPIAS1000型全自动彩色病理图象分析系统，在200倍光镜下测量每个显示屏的阳性染色面积和积分光密度，每组选取5只大鼠标本，每个标本测量10个视野进行半定量分析。1.6原位杂交方法按试

7、剂盒说明进行，半定量分析同免疫组织化学。1.7统计学处理使用SPSS11.5软件，数据以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析。2结果2.1病理学改变假手术组肾小球、肾小管、间质均无明显异常。模型组见间质大量炎性细胞浸润，肾小管萎缩及扩张，肾小球萎缩，小囊黏连。缬沙坦组可见炎性细胞浸润，肾小管部分萎缩，肾小囊轻度扩张。红花组肾间质有小灶性炎性细胞浸润，肾小管轻度扩张，个别肾小囊扩张。Masson染色:假手术组肾小球、肾小管无异常，间质无纤维增生及炎性细胞。模型组可见间质大量纤维组织增生和炎性细胞浸润，肾小管萎缩与扩张。缬沙坦组肾间质有少量炎性细胞浸润和纤维组

8、织增生，肾小管轻度扩张，肾小囊扩张。红花组肾间质可见