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时间:2018-07-08
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1、SOD活性测定POD活性测定CAT活性测定质膜透性测定MDA含量测定色素含量测定实验方案SOD活性测定POD活性测定CAT活性测定质膜透性测定MDA含量测定色素含量测定实验方案一、细胞质膜透性的测定(电导法)材料、仪器设备1.材料:植物叶片,每个样本1cm2的小叶片1g。2.仪器药品:洗洁精;电导仪;电子天平;冰箱;真空泵;真空干燥器;恒温培养箱;电炉;50ml烧杯;50ml量筒;小镊子;纱布;表皿;滤纸条;镜头纸;剪刀;玻棒;胶头滴管;瓷盘。实验步骤1.清洗用具所用玻璃用具均需先用洗洁精清洗,然后用自来水洗3次,再用蒸馏水洗3次,然后放入或倒置在洗净的且垫有洁净滤纸的器皿中干燥后备用。2.实
2、验材料的准备及处理选取叶龄叶位长势均相似的植物叶片,剪下后用湿布包住放在已经编号的保鲜袋中,最后用保鲜盒封存带回。实验前用自来水冲洗叶片,除去表面沾污物,再用蒸馏水冲洗2次,用洁净滤纸轻轻吸干叶片表面水分放于已编号的洁净器皿中,然后分别剪成约1cm2的小叶片(或用直径为1cm2的打孔器钻取小圆片),注意除掉大叶脉。将剪下的小叶片分别混合均匀,每个样本再快速称取鲜样2份,每份0.5g,分别放入编号为X-n-a、X-n-b的50ml烧杯中,另取编号C的烧杯,不加鲜样留作空白本底对照。每个样本的三个烧杯中均加入蒸馏水30ml浸泡,将盛有鲜样的a、b烧杯放入真空干燥器中,用真空泵抽气25min(以抽出
3、细胞间隙中的空气),然后缓缓放入空气,从真空干燥器中取出a、b烧杯,a、C杯继续常温浸泡,b杯称重,盖上表皿,置于电炉上煮沸15min,冷却后再称重并加蒸馏水至原重量,继续室温自然浸泡45min即可测定。各样本处理时浸泡时间和处理温度要保持一致,均保持在室温下。(注:自然浸泡需要4~5h以上,为防止样品表面气泡的影响故用真空干燥管去除气泡,也可以在振荡器上浸泡1~2h。)3.测定电导值在测定前先将各杯浸泡液摇匀,测出各杯样本浸出液电导率值,记录到原始数据表上相应栏中。(注意:每测定完一个样液后,用蒸馏水漂洗电极,再用滤纸将电极擦干,然后进行下一个样液的测定)原始数据表样表如下:电导率测定记录表
4、:备注:时间:______年___月___日________________实验地点:_____________________________实验者:__________________记录者:___________________核对者:________________10/10SOD活性测定POD活性测定CAT活性测定质膜透性测定MDA含量测定色素含量测定实验方案样本编号处理电导率值(μS·cm-1)相对外渗率(%)空白对照C管(常温蒸馏水空白)___—___(第X组第n个重复)a管(常温)b管(煮沸)___—___a管(常温)b管(煮沸)___—___a管(常温)b管(煮沸)4、结果计
5、算按下公式计算低温及常温处理电解质的相对外渗率:电解质的相对外渗率(%)=×100%二、叶绿素含量的测定(丙酮提取法)材料、仪器设备1.材料:植物叶片,每个样本0.5g。2.仪器药品:分光光度计、电子顶载天平(感量0.01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管;95%乙醇(或80%丙酮)、石英砂、碳酸钙粉。实验步骤1.实验材料的准备及处理分别取新鲜洁净叶片,去除中脉剪碎。各称取剪碎的新鲜样品0.5g,放入洁净的研钵中(研完一个样本需将研钵洗净烘干才可研下一个样本),加少量石英砂和碳酸钙粉及2mL95%乙醇研成均浆,再加乙醇5mL,继续研磨至组织变白,静置3~5min。取
6、滤纸1张置于漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把各样本提取液倒入漏斗(用漏斗过滤完一个样本需将漏斗洗净烘干才可过滤下一个样本),滤液流至25mL已编号的棕色容量瓶中;用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中,直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25mL,摇匀。2.测定样本吸光度10/10SOD活性测定POD活性测定CAT活性测定质膜透性测定MDA含量测定色素含量测定实验方案以95%乙醇为空白对照来调零,对各样本叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm和652nm下测定吸光度,记入原始数据记录表中。样表如下:备注:时
7、间:______年___月___日________________实验地点:_____________________________实验者:__________________记录者:___________________核对者:________________Cary:WaveLength(nm):645nm、652nm、665nmAveTime(sec):0.1Replicates:3样本总
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