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《ctla4-ig腺病毒基因局部转染诱导大鼠肾移植免疫耐受》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、CTLA4-Ig腺病毒基因局部转染诱导大鼠肾移植免疫耐受Mar.2007,27(1)实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine竺CTLA4.Ig腺病毒基因局部转染诱导大鼠肾移植免疫耐受平季根,严春寅,吕金星(苏州大学附属第一医院泌尿外科,苏州215006)【摘要】目的通过cn,A4一Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的肾脏移植免疫耐受,并探讨相关机制.方法以CTLA4一Ig基因重组腺病毒为载体,将CTLA4.Ig基因局部转染入SD大鼠肾脏.将SD对Wistar大鼠原位肾移植模型分为三组:组I为空白对照组;
2、组Ⅱ为EGFP空载体对照组;组m为CTLA4一Ig基因转染组.观察大鼠存活时间及肾功能变化.结果组I移植肾存活时间8.17±1.17d;组Ⅱ移植肾存活时间8.00±1.55d;组IⅡ存活时间31.33±6.77d.组Ⅲ存活时间明显延长.转染组术后血清肌酐较同期对照组为低.结论CTLA4一Ig基因局部转染供肾的基因治疗,可诱导异基因大鼠间的肾脏移植免疫耐受,延长肾脏移植物存活时间.[关键词】基因表达;移植;肾脏[中图分类号】Q95—33[文献标识码】A[文章编号】1004—8448(2007)01—0045.03共刺激分子阻断剂CTLA4一Ig是细胞毒T淋巴细
3、胞相关蛋1~t4(CTLA4)胞膜外区与免疫球蛋白IgGFc段融合形成的可溶性重组融合蛋白,CTLA4一Ig是一种新颖的免疫抑制剂,可竞争性抑制CD28与B7结合,从而阻止共刺激信号的传递,使异体抗原反应性T细胞处于无反应状态,延长移植物存活的时间,并达到诱导免疫耐受的效果.与直接注射重组蛋白相比,采用CTLA4一Ig转基因治疗能获得更好的效果,可以在移植物局部持续产生调控分子,既可维持局部的免疫抑制,又可减少对全身的副作用.本实验用CTLA4一Ig基因局部转染大鼠肾脏后进行同种移植,对CTLA4一Ig基因局部转染诱导肾移植免疫耐受进行观察.1材料与方法1.
4、1实验动物清洁级雄性SD及Wistar大鼠,体重180~240g.【收稿日期】200608.18【作者简介】平季根(1965.),男,副主任医师.从事肾移植基础及临床研究,ligang8882000@yahoo.tom.ca由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供[SCXK(沪)2003—0003】.1.2主要试剂20%盐酸氯胺酮注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司);低分子肝素钠(瑞典法玛西亚普强公司);腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV,腺病毒辅助质粒pAdEasy,携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因腺病毒质粒由上海东方肝胆外科医院基因研究所惠赠;抗CTLA4
5、一Ig胞外区单克隆抗体购自美国SantaCruz公司.1.3方法1.3.1CTLA4一Ig腺病毒载体的构建按文献[1】进行,先将CTLA4一Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,然后再把该质粒同腺病毒辅助质粒pAdEasyJ1]i过lipofectamine2000共转染至293细胞,进行体外同源重组,用293细胞包装获得重组腺病毒pAdCTLA4一Ig,最后经过空斑纯化和鉴定,筛选出表达CTLA4一Ig的腺病毒载体,滴度为9×109pfu/ml.1.3.2"袖套法"大鼠原位肾移植模型的建立供体为雄性SD大鼠,受体为雄性Wistar大鼠,具
6、!:———竺!:¨l竺!:!!竺2结果2.1重组腺病毒对移植肾的转染免疫键光也洲!f=_【1利Ill移椅肾内柬特异胜黄)组ll移精肾小特内IJ见ErJ显的特异荧圯f图11__-—■————]}_'一.,ll^鼠好转植术后,穆植肾示踪标ld告基1EGFP丧选的塘光照f×4001图l大鼠肾组织免痤荧光检测2.2移植肾存活时间lI1赶鼠存活时(3I33±677d)峒K1【l【和耋H1(8I7±117d椰800±I55d)【00_12.3大鼠肾移植后肾功能变化术前择功能肯术}7dI刊圳【】肾功能州『『lrj1.,0术ii;l比较,,<0o1组Il】J,鼠术.i
7、14d.血浦I]Jl浓恒jz忙后7diUJ升塌.fH眠丁剁照m水''(表l1表1大鼠肾移植术前,术后血清肌酐浓度变化~lnlob往:木舸比较.P>0f)5.irJ期赴lI蛆llP<Ool与组】术雁锦7d比辑m0I24病理学检查光镜.二纽杉植圩lYJHE也片均持问质广泛的淋巴细胞浸I揪移}训BanffT怍舒粪1:l和翎【】移植肾生Il_Il城f斥反应:组ITT移世圩呈.一I级抓斥匣I2.5免疫组化法检刑CTLA4.Ig在肾组织内的表达纽IT1术后旃7大移柿缃内可见CTLA4一Ig生向染色]肚表达.cTLA4—1gl定位r胞浆.弥漫性[L勺表达fl2
8、}术jj20天移抒内仍CGLA4一Ig壁自J口忖裘达
