hla-g慢病毒转染诱导肾移植免疫耐受的大鼠和细胞实验研究

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1、万方数据中图分类号墅UDC鱼lQ博士学位论文学校代码!Q5三3密级公珏HLA．G慢病毒转染诱导肾移植免疫耐受的大鼠和细胞实验研究StudiesonHLA—GLentivirusTransfectionInducedImmuneToleranceatRatandCellLevels作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：叶少军临床医学外科学湘雅三医院叶放发教授论文答辩日期丝!垒：』：!_7答辩委员会主席中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地

2、方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：碰Q季吼理蝉年勘且学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版：本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。

3、作者签名：埋j王丑日期：尹业年￡月4日导师签名型型’嗍：型年口且万方数据HLA．G慢病毒转染诱导肾移植免疫耐受的大鼠和细胞实验研究摘要背景：人类白细胞抗原I类分子HLA．G在体外实验中证实具有通过多种机制联合作用致免疫耐受的特性，临床上在器官移植术后患者病理标本或者血清中HLA．G水平的升高与急性和慢性排斥的发生率的降低程度相关。国内学者杨宁的研究表明，腺病毒HLA—Gl转染SD至Wistar大鼠受体存活时间明显延长。我们拟用慢病毒HLA—G转染SD至Wistar大鼠保证持久而稳定的表达HLA—G，测试作为干预因素对抗急性排斥的效果。既往的研究表明，靶细胞表达HLA—G能够通过与NK

4、细胞上的抑制性受体的结合，抑制细胞毒性颗粒的靶向释放，也能够通过含HLA—G的细胞膜片转移到NK细胞，使得暂时获得HLA．G的NK细胞转变为抑制性细胞抑制其他NK细胞对靶细胞的杀伤。方法：我们首先建立HLA—G慢病毒体系和SD至Wistar大鼠肾移植排斥反应模型。肾移植模型的建立方法是肾动静脉原位吻合，输尿管膀胱吻合，另外一侧肾脏切除。在肾动脉恢复血供前30分给予0．5ml含有107pfu的HLA．G慢病毒。我们设计的阳性对照组术后常规使用FK506抗排斥，阴性对照组以空白病毒转染。术后第7天检测受体大鼠的血清BUN和Cr值，取各组移植肾做病理组织学检查，并测定HLA—G的表达水平。

5、为了弄清HLA．G抑制NK细胞的杀伤作用在大鼠和人类间的作用方式和效应水平的差异，我们采用大鼠内皮细胞和人类血管内皮细胞为靶细胞，在未转染HLA．G慢病毒和转染HLA—G慢病毒后，以大鼠NK细胞和人类的NK细胞作为攻击细胞，测定四种组合情况下，其杀伤率的差异。结果：输注HLA—G慢病毒对于术后受体大鼠的生存期和改善肾功能的BUN与cr指标相对于空白病毒转染的对照组没有任何差别，但是明显短于使用FK506的抗排斥的对照组。基于Banff标准的病理组织学检查显示，术后7天在实验组和阴性对照组存在严重的排斥反应，而使用FK506抗排斥的阳性对照组只有轻度排斥反应。人NK细胞攻击靶细胞人内皮

6、细胞经转染HLA．G慢病毒，杀伤率从74．8+14．1％显著降低至21．2士4．7％(pO．05)。人NK细胞攻击靶细胞大鼠内皮细胞经转染HLA—G慢病毒，杀伤率从85．3-4-16．3％降低至31．7-4-7．8％，而鼠NK细胞攻击鼠内皮细胞经转染HLA．G慢病毒，杀伤率无明显差别，从25．8士6．5％到26．0-J：5．9％。结论：我们的实验研究表明在SD至Wistar大鼠肾移植模型中表达HLA．G不能延长受体大鼠的生存期或者改善移植肾的功

7、能。HLA．G的有效发挥功能以攻击细胞上有相应的特异性受体为前提，人的免疫细胞上表达有相应受体，而大鼠的免疫细胞上无相应特异性受体或者这种对应的受体有决定性的种属差别。图片19幅，表格10个，参考文献73篇。关键词：大鼠肾移植，HLA．G，基因转染，免疫耐受分类号：R617万方数据StudiesonHLA-GLentivirusTransfectionInducedImmuneToleranceatRatandCellLevelsAbstractBackg