他莫西芬促进hela 宫颈癌细胞系增殖论文

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1、他莫西芬促进HeLa宫颈癌细胞系增殖论文邹自英，朱运龙，王高峰，钟延清，周华，刘亚莉【关键词】宫颈肿瘤【Abstract】AIM：ToinvestigateoxifenisinvolvedintheproliferationofculturedHeLacellline,cervicalcarcinomacelllineofhumanbeings.METHODS：Thelevelofcellproliferationetryandlaserscanningconfocalmicroscope.RESULTS：Tamoxifen(1×10-7molL-1)shif

2、tedthecurveupoxifen(1×10-8~1×10-6molL-1)significantlystimulatedthecellproliferationandfacilitated(1×10-6molL-1)G1/StransferofthecellcycleasoxifenmaymodulatetheproliferationandthedifferentiationofculturedHeLacervicalcarcinomacellsbyaffectingthecellcycleandCa2+inthecells.【Keyoxifen;ce

3、rvixneoplasms;celldivision【摘要】目的：研究他莫西芬（tamoxifen,TAM）对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法：应用生长曲线测定、MTT、流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜等技术.结果:TAM（1×107molL1）使HeLa细胞的生长曲线向上移动；TAM（1×108~1×106molL1）可显著促进HeLa细胞增殖；TAM（1×106molL1）促进细胞G1/S期转化，并显著促进细胞内Ca2+释放.结论：TAM可能对子宫颈癌细胞的生长和分化具有重要的调节作用,这种调节作用可能是通过影响细胞周期和胞内Ca2+水平而实现的.【关键

4、词】他莫昔芬;宫颈肿瘤;细胞分裂0引言他莫西芬（tamoxifen,TAM）既是雌激素的拮抗剂又是其协同剂，这取决于雌激素受体是激活还是抑制靶基因.例如.freela),MTT(华美生物公司)，二甲基亚砜（Serva公司），furo3/AM(Sigma),酶联免疫检测仪（Beckman）,EliteESP流式细胞仪（Coulter公司），激光扫描共聚焦显微镜（BioRad）.1.2方法1.2.1HeLa细胞系培养将HeLa细胞培养于DMEM培养基（DMEM1L中加Hepes3.57g，NaHCO32g），置于37℃，50mLL1CO2培养箱中.培养的HeLa细

5、胞可重叠生长，每3d传代.传代时，移去旧培养液，DHank′s液冲洗2次，11加入EDTA和胰酶，消化2.5min，离心后重悬于新培养瓶中，传代率为12或13.1.2.2生长曲线的测定细胞按常规传代方法离心悬浮后，在倒置显微镜下用记数板记数，调整细胞数为1.8×107L1，1mL/孔接种24孔板，在37℃，50mLL1CO2的培养箱继续培养.从第2日始，每日取3孔细胞进行记数，取平均值，共记数7d.记数到第4日，给未记数细胞换新培养液.1.2.3MTT比色实验用含50mLL1小牛血清的DMEM将细胞制成5×107L1的细胞悬液，接种于96孔培养板内，每孔100

6、μL.实验设阴性对照组和各种TAM药物浓度(1×109,1×108,1×107和1×106molL1)实验组.每孔加入含50mLL1小牛血清的DMEM配制的药液100μL，每种药物浓度8个孔，48h后，每孔加入20μL浓度为5gL1的MTT，37℃培养箱继续培养4h，去上清后，每孔加入150μL二甲基亚砜，振荡器振荡10min，测A490nm值.1.2.4流式细胞术细胞等量接种于2个25mL培养瓶，第2日弃旧培养液，加入以含50mLL1小牛血清的DMEM稀释的TAM（1×106molL1）药液2mL，37℃培养箱培养48h后，收集细胞.消化下来的细胞用2.5m

7、LPBS洗涤2次（800~1000rmin1离心,.freelin）,弃上清；加入1mLPBS将细胞混匀，再加入2mL无水乙醇立即振荡混匀，封口膜封口，4℃冰箱保存备用.送检时，用PBS洗涤2次，弃除无水乙醇，加100μLPBS将细胞吹散，调整细胞数为6×108L1,碘化丙锭染色，用流式细胞仪测定DNA含量，分析用药后细胞周期的变化.1.2.5细胞内钙的测定将HeLa细胞以2×108L1接种于特制的培养皿中，培养48h，用DHank′s液洗涤2次，在37℃烘箱内用furo3/AM(10μmolL1)荷载50min,再用DHank’s液洗涤2次，用共聚焦显微镜扫

8、描加TAM前细胞内钙的荧光强度，向培养