鲎试验测定长链脂肪乳注射液中细菌内毒素的方法学研究论文

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1、鲎试验测定长链脂肪乳注射液中细菌内毒素的方法学研究论文【摘要】目的：确定长链脂肪乳注射液中细菌内毒素鲎试验检查法的可行性。方法：供试品干扰试验后，采用凝胶鲎试验对样品中细菌内毒素进行检测。结果：三批长链脂肪乳注射液稀释至2倍时对细菌内毒素的检测无干扰作用，所测样品的细菌内毒素含量均小于0.5EU·ml-1。结论：所建立方法检查长链脂肪注射液中的细菌内毒素可行。【关键词】长链脂肪乳注射液；细菌内毒素；鲎试验；干扰试验细菌内毒素检查是药品一个非常重要的安全指标，输液导致热原超标是输液反应的主要原因1，近年来，世界各国越来越多地以细菌内毒素检查法代替家兔热原法检查药

2、品和生物制品的致热物质越来越普遍。长链脂肪乳注射液临床常用口服或肠内营养摄取不能、不足或禁食的患者，进行肠外营养补充脂肪。《中国药典》2005年版尚未收载该品种。为此，特对国产长链脂肪乳注射液进行了细菌内毒素的检查。1药品与试剂长链脂肪乳注射液.freell：5g脂肪与3g磷脂，批号：E080401E080402E080403，细菌内毒素标准品（中国药品生物制品检定所，批号：150601200860，每支160EU）；细菌内毒素检查用水（湛江博康海洋生物制品有限公司，批号：080529）；鲎试剂（湛江安度斯生物制品有限公司，λ=0.25EU·ml-1,批号：

3、0805081），鲎试剂（湛江博康海洋生物有限公司，λ=0.25EU·ml-1，批号：0801220）2方法与结果2.1鲎试剂灵敏度（λ）的复核照《中国药典》2附录规定的方法，对实验所用的鲎试剂（TAL）进行灵敏度复核。结果鲎试剂的实测灵敏度均在0.5λ～2.0λ之间，符合规定。正式实验时取λ作为鲎试剂的灵敏度。2.2样品细菌内毒素限值（L）的确定参照《中国药典》确定样品的细菌内毒素限值（L），L=K·M-1，K为人用每千克体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，非放射性药品静脉途径给药时K值为5EU·kg·h-1，M为人用每千克体重每小时给药最大剂量。长链脂肪

4、乳注射液成人最大剂量为0.75ml·kg-1·h-1。综合生产、临床用药和检验的实际情况，将长链脂肪乳注射液的L值定为0.5EU·ml-1。表1样品的干扰预试验表2CAADI的干扰试验2.3样品的干扰试验用λ=0.25EU·ml-1鲎试剂进行干扰试验时。取2.1项下鲎试剂，分别对1批已检测细菌内毒素不超标的样品进行原液、2倍和4倍稀释（批号：E080401），进行细菌内毒素干扰试验。样品在表1所述3种浓度下，对细菌内毒素检查均无干扰，故正式实验将样品稀释至2倍和4倍，并取2个厂家灵敏度为0.25EU·ml-1的鲎试剂，参照有关文献3按灵敏度复核方法对样品稀释至

5、2倍和4倍进行干扰实验，并计算以样品稀释液配制的细菌内毒素溶液反应终点浓度的几何均值（Et)及细菌内毒素检查用水配制的内毒素溶液反应终点浓度的几何均值（Es）。表2可以看出，用长链脂肪乳注射液的2倍和4倍稀释液进行干扰试验时，其Et与相应的Es均在0.5～2.0之间，且Es在0.5λ～2.0λ之间，表明此时样品2倍和4倍稀释液对细菌内毒素检查均无干扰。2.4样品中细菌内毒素的常规检查取上述3批长链脂肪乳注射液稀释2倍，以λ=0.25EU·ml-1的鲎试剂，按常规凝胶法进行细菌内毒素检查（表3）。结果上述3批长链脂肪乳注射液2倍稀释液中的细菌内毒素含量均小于0.

6、25EU·ml-1，且对鲎试验检查无干扰作用。表3样品中细菌内毒素的常规检查3讨论凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测4，要求在适宜的温度、pH值及无干扰作用时鲎试剂能与微量的细菌内毒素反应形成凝胶，通过肉眼观察结果。在建立新药的细菌内毒素检查法时，首先要确定其细菌内毒素限值，还要求至少取3批样品，并应用2个厂家的鲎试剂进行细菌内毒素的干扰试验，确认样品在某一浓度下不会干扰细菌内毒素检查2，本品根据长链脂肪乳注射液最大临床的规定剂量，确定其细菌内毒素限值为内毒素应小于0.5EU·ml-1，并应用2个厂家鲎试剂对3批长链脂肪注射液样品进行了细菌内毒

7、素检查的干扰试验，结果当样品稀释2倍时，对鲎试验检查无干扰作用。从而证实可以建立该品种的细菌内毒素检查法，其细菌内毒素限值应小于0.5EU·ml-1。【