鲎试验检测甘氨酰谷氨酰胺中细菌内毒素的方法学研究

《鲎试验检测甘氨酰谷氨酰胺中细菌内毒素的方法学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果鲎试验检测甘氨酰谷氨酰胺中细菌内毒素的方法学研究【摘要】目的：确定甘氨酰谷氨酰胺细菌内毒素鲎试验检查法的可行性。方法：供试品干扰试验后，采用凝胶鲎试验对样品中的细菌内毒素进行检测。结果：三批样品稀释至20mg/mL、10mg/mL时，对细菌内毒素的检测均无干扰作用，样品中细菌内毒素的含量均小于/mg。结论：所建立方法检查甘氨酰谷氨酰胺的细菌内毒素可行。【关键词】甘氨酰谷氨酰胺；细菌内毒素；鲎试验；干扰试验细菌内毒素检查是药品一

2、个非常重要的安全指标。特别对注射用原料药和注射用制剂药。近年来，世界各国越来越多地以细菌内毒素检查法检查药品和生物制品中致热物质来代替兔法进行热原检查。甘氨酰谷氨酰胺溶解度大，进入人体内迅速水解为甘氨酸和谷氨酰胺而发挥作用。谷氨酰胺是人体内的一种条件必需氨基酸。临床上谷氨酰胺、酪氨酸与支链氨基酸以二肽形式应用于急性胰腺炎、肝、肾、骨骼肌患者的相应氨基酸供应，如复方氨基酸双肽注射液。《中国药典》XX年版尚未收载该品种。我们对3批样品进行了细菌内毒素检测，以考察该方法的可行性。1药品与试剂　课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出

3、结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　甘氨酰谷氨酰胺；细菌内毒素标准品；细菌内毒素检查用水；鲎试剂，鲎试剂。方法与结果.1鲎试剂灵敏度的复核　　　照文献［1］附录规定的方法，对实验所用的鲎试剂进行灵敏度复核。结果鲎试剂的实测灵敏度均在～λ之间，符合规定。正式实验时取λ作为鲎试剂的灵敏度［2］。.2样品细菌内毒素限值的确定　　　参照《中国药典》确定样品的细菌内毒素限值，L=K/M，K为人用每公斤体重每小时最大可接受的细菌内

4、毒素剂量，非放射性药品静脉途径给药时K值为EU/(kg·h)，M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以mg/(kg·h)表示，人均体重按60kg计算，甘氨酰谷氨酰胺现在临床最大用量约为50mg/kg。L值应为EU/mg。参照《中国药典》XX年版二部甘氨酸原料细菌内毒素的限度值［1］和临床用量，根据生产控制从严的实际情况，综合生产、临床用药和检验的实际情况，将甘氨酰谷氨酰胺的L值定为/mg。.3样品的干扰试验　　　确定最大有效稀释倍数，照文献课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本

5、学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果［1］附录规定样品为原料药，MVD取1，可计算样品的最小有效稀释浓度c=λ/L，用λ=/mL鲎试剂进行干扰试验时，即样品最小稀释浓度为10mg/mL，将样品稀释至40mg/mL、20mg/mL、10mg/mL浓度。取“”项下鲎试剂，分别对3批已检测细菌内毒素不超标的样品，进行细菌内毒素干扰试验。样品在表1所述3种浓度下，对细菌内毒素检查均无干扰［2］。表1样品的干扰预试验(略)参照文献［1］取2个厂家灵敏度为/mL的鲎试剂，分别对

6、3批样品浓度为20mg/mL、10mg/mL进行细菌内毒素干扰试验确认，并计算以样品稀释液配制的细菌内毒素溶液反应终点浓度的几何均值及细菌内毒素检查用水配制的内毒素溶液反应终点浓度的几何均值，结果见表2。表2干扰试验通过上述干扰试验的结果表明，供试品在20mg/mL、10mg/mL浓度下，进行干扰试验时，其Et与相应的Es均在～之间，且Es在～λ之间，说明供试品在20mg/mL、10mg/mL对细菌内毒素检查均无干扰。.4样品中细菌内毒素的常规检查　　　参照文献［1］，取上述3批甘氨酰谷氨酰胺稀释至10mg/mL后，以λ=/mL的鲎试剂，按常规凝胶法进行细菌

7、内毒素检查。结果样品在10mg/mL中的细菌内毒素含量均小于/mg，且对鲎试验检查无干扰作用。表3课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果样品中细菌内毒素的常规检查讨论　　　凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法，条件是适宜的温度、pH值及无干扰作用。因此，新药品种是否可用细菌内毒素检查法替代兔法热原检查，首先要证实是否存在

8、干扰因素，确定该品种在有效浓度范围内进行细菌内毒素检