原癌基因表达在哮喘气道重塑中的作用论文

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1、原癌基因表达在哮喘气道重塑中的作用论文.freelyc，c-jun和c-sis的表达及其与气道重塑的关系.结果正常豚鼠气道及肺组织中c-fos和c-mycmRNA无或很少表达，哮喘发作后，豚鼠气道上皮及肺组织c-fos和c-mycmRNA表达明显增加;免疫组织化学染色显示Fos，Myc.freela;airodeling;guineapigsAbstract:AIMToexploretheroleofproto-oncogenesintheprocessofairodelinginasthma.METHODSGuineapigsamodelsch

2、allengedbyovoglobulin.Dot-blot，Northern-blotmolecularhybridizationandimmunohistochemistrytechniquesyc，c-junandc-sis.RESULTSc-fosandc-mycmRNAcouldnotbedetectedorexpressedatveryloinafterthechallenge，theexpressionsofc-fosandc-mycmR-NAreachedthepeakandreturnedtonormal4hafterthech

3、allenge.Immunohistochemistrystudyshoulation.Immunohis-tochemicallypositivecellslayintheplasmaofair，incellnucleusofbronchialepitheliumandininflamma-torycells.Pathologicstudiesshooothmusclethick-enedaroundbronchiaandlymphocyteinfiltrationundermu-cosaoraroundbronchiasmoothmuscle

4、.CONCLUSIONProto-oncogenesexpressionplaysanimportantroleintheprocessofasthmaairodeling.0引言气道重塑（Airodeling）是支气管哮喘的重要病理特征之一，是哮喘长期反复发作的结果.许多因素如炎症介质、细胞因子及原癌基因都参与了这一过程.气道重塑是气道狭窄的重要原因，慢性气道炎症与气道重塑及气道高反应性的发生关系极为密切.原癌基因是生物体内的一类高度保守基因，控制细胞的生长和分化，同时参与炎症的发生.本研究通过检测豚鼠哮喘模型气道c-fos，c-jun及Fos

5、，Jun，Myc，Sis的表达，以探讨它们与气道重塑的关系.1材料和方法1.1材料盐酸胍、SDS购自美国Sigma公司，［α-32P］dATP为北京福瑞公司产品，缺口平移标记盒为BRI公司产品，c-fos，c-myc质粒及Fos，Myc蛋白抗体由本校解剖教研室提供，Jun多克隆抗体购自北京中山生物技术公司，Sis抗体购自SantaCruz公司.1.2动物及标本制作正常成年雄性豚鼠（本校实验动物中心提供）40只，体质量300～400g，随机分为实验组（20只）和对照组（20只），实验组用100gL-1的卵蛋白生理盐水ip致敏，2L冷生理盐水经右心室

6、快速冲洗，再以300mL40gL-1多聚甲醛缓慢灌注，固定40min，取气管、不同部位支气管置于同一固定液中固定12h，随之浸泡于4℃，200gL-1蔗糖液内，于-20℃制备40μm厚片和15μm的邻片.1.3总RNA的提取放血处死动物，立即剥离气道及肺组织，置-70℃冰箱冻存，异硫氰酸胍-饱和酚-氯仿法提取总RNA［1］.1.4气道及肺组织c┐fos，c┐mycmRNA的测定用含c-fos和c-myc的cDNA质粒，按Sambrook等［2］方法转染细菌，扩增制备质粒，相应内切酶酶切后用低融点琼脂糖法回收cDNA片段，［α32P］-dATP缺口

7、平移法分别标记fos和myc基因cDNA探针片段，然后进行RNA斑点杂交和Northern杂交.1.5Fos和Myc蛋白的免疫组化染色ABC法按序PBS漂洗组织切片，以30mLL-1羊血清1200稀释一抗，二抗以1200稀释，孵育1h，经PBS，Tris-HCl缓冲液充分漂洗，DAB显色，Mayer苏木精复染2min.以10mmolL-1磷酸盐缓冲液、正常羊及兔血清取代第一抗体行空白对照与替代对照.1.6Jun蛋白免疫组织化学染色按ABC法进行，40μm厚切片置入含3mLL-1H2O2的甲醇溶液（800mLL-1甲醇配制）30min，加入含1mL

8、L-1TritonX-100的绵羊抗Jun血清（1400，10mmolL-1PBSpH7.2～7.4配制），37℃孵育30min，4℃孵