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1、脂多糖诱导小鼠肝损伤介质水平变化及五灵胶囊的作用：刘明义，王胜春，赵慧萍【摘要】 目的探讨脂多糖（LPS）诱导小鼠肝损伤介质水平变化及五灵胶囊的作用。方法小鼠尾静脉注射（iv）LPS3.5mg/kg，酶法检测3，6，12和24h小鼠血清ALT、AST、ALP、TRIG，化学法测定肝组织内MDA、NOS水平，免疫组化检测肝组织内TNF-α，CD14，iNOS，eNOS的阳性表达率。结果与正常组比较,小鼠iv注射LPS后3h血清ALT，AST水平明显升高并持续至12h，24h下降仍显著高于正常组，ALP水平明显持续下降。在12hMDA含量显著
2、升高，24h下降但明显高于正常组，而甘油三酯（TG）水平各时间点明显升高，TNF-α，CD14，iNOS，eNOS阳性表达率上调。五灵胶囊能明显降低ALT，AST水平和MDA含量，对ALP和TRIG水平无作用，抑制肝组织内TNF-α，CD14，iNOS，eNOS阳性表达率。结论MDA，TNF-α，CD14，iNOS，eNOS参与了LPS诱导肝损伤，五灵胶囊抑制LPS诱导肝损伤的作用机制与抑制活性递质生成有关。【关键词】肝损伤一氧化氮合酶活性介质脂多糖 Abstract：ObjectiveToexplorethechangeofmediat
3、orlevelsinhepaticinjuredmiceinducedbyLipoplysaccharide(LPS)andeffectsofethodsLPSicebyinjectiong/kgviathetailvein,3,6,12,24hourslater,thelevelsofALT,AST,ALPinserumemethodandthecontentsofMDA,NOSinhepatictissueofmiceinedbychemistry,immunohistochemistrymethodployedtodeterminet
4、heexpressionofTNF-α,CD14,iNOSandeNOSinhepatictissue.Results3hoursafterLPSice,paredalgroup,thelevelsofALTandASTalgroup.ThelevelofALPal.Theleveloftriglyceridesarkedlyup-regulated.ConclusionThemediatorsasMDA,TNF-α,CD14,iNOS,eNOSparticipatedinliverinjuryinducedbyLPS,theprotect
5、ivemechanismDA）,一氧化氮合酶（NOS）试剂盒（南京建成）；Rabbitanti-CD14，TNF-α，NOSⅡ（iNOS），NOSⅢ（eNOS）一抗（武汉博士德）；S-P超敏试剂盒（福州迈新）；脂多糖（LPS）（Sigma公司）；五灵胶囊（中国人民解放军第四军医大学西京医院药剂科提供，批号：20040122），称取五灵胶囊2g，蒸馏水加热溶解至10ml为经口给药供试液。 2方法 2.1LPS诱导小鼠肝损伤血清酶实验取昆明小鼠96只，随机分成3组（每组设4个时间点：3，6，12，24h）：正常组、LPS组、五灵胶囊组，每组
6、每时间点8只。正常组和LPS组分别ig蒸馏水10ml/kg，五灵胶囊组ig五灵胶囊2.0g/kg，各组小鼠ig给药1次/d，连续给药5次，小鼠禁食自由饮水，末次给药2h后正常组各时间点小鼠尾静脉注射(iv)生理盐水2ml/kg，其余2组各时间点小鼠ivLPS3.5mg/kg，iv后分别于3，6，12，24h眼眶取血，放置30min，离心，分离血清，酶法测定TRIG，ALT，AST，ALP。 2.2肝组织内MDA、TRIG、NOS测定和免疫组化实验迅速取上述实验小鼠肝脏剔去胆囊，用冰冷生理盐水洗去血渍，滤纸吸干水分，除肝大叶外的肝组织制成1
7、0%肝匀浆，10000r/min离心，取上清按试剂盒说明书测定MDA、TRIG、NOS：肝大叶用10%甲醛（0.01mol/L）磷酸缓冲液固定48h，石蜡包埋、切片，脱蜡至水洗,分别与抗CD14、抗TNF-α、抗iNOS、抗eNOS（1∶100）进行孵育，按试剂盒操作说明进行免疫组化反应，用二氨基联苯胺（DAB）-0.3mlH2O2/L系统显色10min。苏木素衬染、脱水透明后，中性树胶封片。阴性对照片用PBS替代一抗。结果评定：标本无明确阳性反应者为阴性，在40倍镜下以Miaspro图象分析系统程序扫描染色阳性细胞,每只小鼠肝组织扫描5个
8、视野计数阳性细胞，结果以阳性细胞率表示。 2.3统计学处理采用SPSS10.0版统计软件，所测数据以（±s）表示，采用单因素方差分析。 3结果 3.1LPS诱导小鼠肝损伤不
